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高等植物クラスXIミオシンのオルガネラ識別機構の解析

高等植物XI类肌球蛋白的细胞器识别机制分析

基本信息

批准号：
17051026
负责人：
横田悦雄
金额：
$ 3.84万
依托单位：
University of Hyogo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

オルガネラ輸送や原形質流動に関与するミオシンXIのオルガネラ識別や結合部位は、ミオシン重鎖C端尾部鎖域に存在すると考えられている。シロイヌナズナのミオシンXIであるMYA2の重鎖C端尾部鎖域と相互作用する成分を、シロイヌナズナ根のライブラリーを用いた酵母ツーハイブリッド法を用いて検索を行った。その結果、2種の低分子量GTP結合タンパク質Rabに属するAtRabC2aとAtRabD1が検出されてきた。そして、それぞれのRabタンパク質とMYA2のC端尾部鎖域を大腸菌で発現させたリコンビナントタンパク質を用いて、タンパク質レベルでの結合実験を行った結果、両Rabタンパク質共に、結合性は低いがGTP依存的にC端尾部鎖域と相互作用することが明らかになった。またhbタンパク質の結合に必要なC端尾部鎖域は、2種のRabタンバク質で異なっていた。次に、細胎内における両Rabタンパク質の局在を解析した。両Rabタンパク質の一次構造はよく類似しているため、それぞれのRabタンパク質や他のRabタンパク質を特異的に識別する抗体の作成は不可能であると考えた。そこでGFP-ペルオキシゾームが発現しているシロイヌナズナ葉肉細胞に、YFPを連結させたRabタンパク質を35Sプロモーターによってトランジェントに発現させた。その結果、YFP-AtRabD1は細胞質全体に分散していたのに対し、YFP-AtRabC2aはGFP-ペルオキシゾームと共局在していた。以上の結果から、AtRabC2aを介してMYA2がペルオキシゾームに結合することが示唆された。現在、本当にAtRabC2aがペルオキシゾームに存在しているのかどうかを、ペルオキシゾーム両分を調製してそこに含まれる成分をMS/MS分析によるプロテオーム解析によって確認しているところである。

The relationship between the transport and the flow of protoplasm and the identification of the binding site and the presence of the C-terminal tail lock region is discussed. MYA2 relocks C-terminal lock domain and interacts with MYA2 relocks C-terminal lock domain. The results showed that two low molecular weight GTP binding proteins, AtRabC2a and AtRabD1, were detected. The results show that the binding of RAB protein to MYA2 C-terminal tail lock domain in E. coli was detected, and the binding of RAB protein to MYA2 C-terminal tail lock domain in E. coli was detected. C-terminal tail lock domain is necessary for the combination of two kinds of Rab. In the second place, the quality of the product is analyzed. The primary structure of the Rab's protein is similar to that of the Rab's protein, and it is impossible to make antibodies that recognize other Rab's protein. The GFP-selection process was developed by linking the GFP-selection process to the 35S-selection process. As a result, YFP-AtRabD1 is dispersed throughout the cytoplasm, and YFP-AtRabC2a is distributed throughout the cytoplasm. The above results show that AtRabC2a is the most important factor in MYA2. Now, when AtRabC2a is present, it can be identified by MS/MS analysis.

项目成果

期刊论文数量（6）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Possible association of actin filaments with chloroplasts of spinach mesophyll cells in vivo and in vitro

DOI：
10.1007/s00709-006-0189-8
发表时间：
2006-11-01
期刊：
PROTOPLASMA
影响因子：
2.9
作者：
Kumatani, T.;Sakurai-Ozato, N.;Takagi, S.
通讯作者：
Takagi, S.

Microtubule- and actin filament-dependent motors are distributed on pollen tube mitochondria and contribute differently to their movement

DOI：
10.1093/pcp/pcm001
发表时间：
2007-02-01
期刊：
PLANT AND CELL PHYSIOLOGY
影响因子：
4.9
作者：
Romagnoli, Silvia;Cai, Giampiero;Cresti, Mauro
通讯作者：
Cresti, Mauro

Plant villin, lily P-135-ABP, possesses G-actin binding activity and accelerates the polymerization and depolymerization of actin in a Ca2+-sensitive manner.

DOI：
10.1093/pcp/pci185
发表时间：
2005-10
期刊：
Plant & cell physiology
影响因子：
4.9
作者：
E. Yokota;M. Tominaga;I. Mabuchi;Yasunori Tsuji;C. Staiger;K. Oiwa;T. Shimmen
通讯作者：
E. Yokota;M. Tominaga;I. Mabuchi;Yasunori Tsuji;C. Staiger;K. Oiwa;T. Shimmen

Clathrin is involved in organization of mitotic spindle and phragmoplast as well as endocytosis in tobacco cell cultures.

网格蛋白参与有丝分裂纺锤体和成膜体的组织以及烟草细胞培养物中的内吞作用。