权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

原形質流動のモータータンパク質・ミオシン分子の解析

血浆流运动蛋白和肌球蛋白分子的分析

基本信息

批准号：
07740626
负责人：
横田悦雄
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Himeji Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07740626/
关键词：
原形質流動ミオシンカルシウムイオンアクチン

项目摘要

ユリ花粉管から単離、精製した170-kDa重鎖からなるミオシン(170-kDaミオシン)の活性(F-アクチンによって活性化されるATPase活性とin vitroでF-アクチンを滑走させる運動活性)は、μMオーダーのカルシウムイオンによって阻害される。この阻害機構を170-kDaミオシンの軽鎖サブユニットの同定も含めて詳しく解析した。カルシウムイオンによる170-kDaミオシンの運動活性阻害にATPは必要ではないことから、ミオシンがリン酸化されることにより阻害が起こっているのではないと考えられた。また、^<45>Caを用いたゲルオーバーレイ法の結果から、カルシウムイオンは170-kda重鎖に直接結合しなかった。ホウレンソウのカルモジュリン(CaM)に対する抗体を使ったイムノブロットと免疫沈降実験の結果から、170-kDa重鎖にCaMが結合していることがわかった。この結合しているCaMは10^<-5>M以上のカルシウムイオンが存在すると170-kDa重鎖から解離した。またCaMはニトロセルロース膜上に固定された170-kDa重鎖に、カルシウムイオン濃度が低いと結合した。以上の結果から、ユリ花粉管170-kDaミオシンの軽鎖サブユニットの一つはCaMであり、カルシウムイオン濃度が高くなると170-kDa重鎖から解離すること、またCaMを介して170-kDaミオシンの活性がカルシウムイオンによって制御されていることが明らかになった。高等植物からカルシウムイオン感受性を保持したミオシンを単離して、その機構を分子レベルで解明したのは本研究が初めてである。現在カルシウムイオンが軽鎖サブユニットであるCaMに結合しただけで170-kDaミオシンの活性が阻害されるのか、あるいはCaMがカルシウムイオンによって170-kDa重鎖から解離することにより活性が阻害されるのかを解析中である。

ユリPollen tube から single separation, refined 170-kDa heavy lock からなるミオシン(170-k Daミオシン)のactivity(F-アクチンによってactivationされるATPase activityとin vitroでF-アクチンをgliding and movement activity)は, μMオーダーのカルシウムイオンによってblocking and damage. The blocking mechanism of この170-kDaミオシンの軽LOCKサブユニットの同定も有めて detailしくanalyticsした.カルシウムイオンによる170-kDa ミオシンのmotility activity blocking にATP はではないことから、ミオシンがリン acidification されることにより hinders がrise こっているのではないと卡えられた.また、^<45>CaをUsing the いたゲルオーバーレイ法のRESULTSから、カルシウムイオンは170-kda heavy locking に is directly combined with しなかった.ホウレンソウのカルモジュリン(CaM)に対するAntibodiesを使ったイムノブロットと无Epidemic deposition 実験のRESULTSから、170-kDa heavy lockにCaMがcombinationしていることがわかった.この合しているCaMは10^<-5>M and above のカルシウムイオンが presence すると170-kDa heavy lock から dissociation した.またCaM はニトロセルロース fixed on the membrane された170-kDa heavy lock に, カルシウムイオン concentration がlow and combined した. The results of the above are から、ユリPollen tube 170-kDa ミオシンの軽 lock サブユニットの一つはCaMであり、カルシウムイオンconcentrationが高くなると170-kD a Heavy locking dissociation すること、またCaMを Introduction 170-kDaミオシンのActive がカルシウムイオンによってcontrol されていることが明らかになった. Higher plant phytozoologyて, そのMechanism をmolecule レベルで clarification したのは This study is the beginning めてである. Now the カルシウムイオンが軽 lock サブユニットであるCaMにcombinationしただけで170-kDa ミオシンのActivity が hinder されるのか、あるいはCaMがカルシウムイオンによって170-kDa heavy lockからDissociation することによりActivity がHinder されるのかをANALYSIS である.