高等植物小胞体のチューブ構造形成機構の解析

高等植物内质网管状结构形成机制分析

• 批准号: 19039031
• 负责人: 横田 悦雄
• 金额: $ 2.69万
• 依托单位: University of Hyogo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19039031/
• 关键词: 小胞体; レティキュロン; ミオシンXI; アクチン; ミオシンVIII; 細胞骨格; タバコ培養細胞BY-2; シロイヌナズナ; GTP加水分解; ミオシン

小胞体(ER)チューブ形成を担っていると考えられているシロイヌナズナレティキュロン様タンパク質(RTN)を、一次構造の類似性からいくつかのグループに分類し、その内2つのグループ1、2に対するペプチド抗体をそれぞれ作製した。それらの抗体を用いて細胞染色を行ったところ、グループ1RTNは表層チューブ状構造が染色され、細胞内部にはシグナルが観察されなかった。そして植物体における発現を解析したところ、このグループに属するRTNの中で、RTN17とRTN18が発現しているごとがわかった。この2つのRTN遺伝子にGFPを連結したプラスミドをシロイヌナズナ培養細胞に導入して、これらのRTNを過剰発現させた。GFP-RTN17は表層チューブ構造と、過剰発現のためか細胞内部や核膜にも局在していた。またGFP-RTN18を過剰発現した細胞では、細長い袋構造溝観察されるようになった。この結果は、このRTN過剰発現によって、小胞体の形態変化が引き起こされた可能性を示唆した。一方グループ2に属するRTNは、抗体染色により細胞表層のチューブ構造、細胞質糸など、つまり小胞体全体に局在することが明らかになった。またMS解析によって、この抗体と反応しているRTNはRTN3であることがわかった。そしてサイトゾルとミクロゾームを含んだS2画分を用いて、in vitroにおけるERチューブ形成におけるミオシンの役割を解析した。その結果、チューブ伸長にはミオシンXIが重要であり、ミオシンVIIIは関与しないこと。まだミオシンXIが尾部領域で小胞体と相互作用あるいは結合して、アクチン繊維上をひっぱることによってERチューブ伸長が引き起こされる可能性が示唆された。

Small cell body (ER) チ ュ ー ブ form を bear っ て い る と exam え ら れ て い る シ ロ イ ヌ ナ ズ ナ レ テ ィ キ ュ ロ ン others タ ン パ ク mass (RTN) を, a construct の similarity か ら い く つ か の グ ル ー プ に classification し, そ の within 2 つ の グ ル ー プ 1, 2, に す seaborne る ペ プ チ ド antibody を そ れ ぞ れ cropping し た. を そ れ ら の antibody with い dyeing line を っ て cells た と こ ろ, グ ル ー プ 1 RTN は surface チ ュ ー ブ structure が dyeing さ れ, intracellular に は シ グ ナ ル が 観 examine さ れ な か っ た. そ し て plant に お け る 発 now を parsing し た と こ ろ, こ の グ ル ー プ に genus す る RTN の で, RTN17 と RTN18 が 発 now し て い る ご と が わ か っ た. こ の 2 つ の RTN posthumous son 伝 に GFP を link し た プ ラ ス ミ ド を シ ロ イ ヌ ナ ズ ナ culture cell に import し て, こ れ ら の RTN を before turning 発 now さ せ た. The surface layer of GFP-RTN17 チュ チュ ブ ブ is composed of と, and the <s:1> ため ため is present inside the cell. The や nuclear membrane に is located in the て た た た た た. Youdaoplaceholder0 GFP-RTN18を with excessive presence of た cells で, slender <s:1> pocket structure groove 観 observation されるようになった. The <s:1> results of <s:1>, the excessive occurrence of <s:1> RTN によって, and the transformation of the <s:1> morphology of small cells が have raised the possibility of <s:1> された を, which indicates that た た. One party グ ル ー プ に 2 genera す る RTN は, antibody staining に よ り cell surface の チ ュ ー ブ structure, cytoplasm si な ど, つ ま り small cell body all に bureau in す る こ と が Ming ら か に な っ た. ま た MS analytical に よ っ て, こ と の antibodies against 応 し て い る RTN は RTN3 で あ る こ と が わ か っ た. そ し て サ イ ト ゾ ル と ミ ク ロ ゾ ー ム を containing ん だ S2 を draw points with い て, the in vitro に お け る ER チ ュ ー ブ form に お け る ミ オ シ ン の service cut を parsing し た. そ の results, チ ュ ー ブ elongation に は ミ オ シ ン XI が important で あ り, ミ オ シ ン VIII は masato and し な い こ と. ま だ ミ オ シ ン XI が で small cell body tail field と interaction あ る い は combining し て, ア ク チ ン 繊 dimension を ひ っ ぱ る こ と に よ っ て ER チ ュ ー ブ elongation が lead き up こ さ れ が る possibility in stopping さ れ た.

项目成果

An isoform of Arabidopsis myosin XI interacts with small GTPases in its C-terminal tail region.

拟南芥肌球蛋白XI的同工型与其C末端尾部区域的小GTPase相互作用。

• DOI: 10.1093/jxb/ern202
• 发表时间: 2008
• 期刊: JOURNAL OF EXPERIMENTAL BOTANY
• 影响因子: 6.9
• 作者: Hashimoto, Kohsuke;Igarashi, Hisako;Mano, Shoji;Takenaka, Chikako;Shiina, Takashi;Yamaguchi, Masatoshi;Demura, Taku;Nishimura, Mikio;Shimmen, Teruo;Yokota, Etsuo
• 通讯作者: Yokota, Etsuo

Microtubule- and actin filament-dependent motors are distributed on pollen tube mitochondria and contribute differently to their movement

• DOI: 10.1093/pcp/pcm001
• 发表时间: 2007-02-01
• 期刊: PLANT AND CELL PHYSIOLOGY
• 影响因子: 4.9
• 作者: Romagnoli, Silvia;Cai, Giampiero;Cresti, Mauro
• 通讯作者: Cresti, Mauro

The preprophase band is a localized center of clathrin-mediated endocytosis in late prophase cells of the onion cotyledon epidermis

• DOI: 10.1111/j.1365-313x.2008.03725.x
• 发表时间: 2009-03-01
• 期刊: PLANT JOURNAL
• 影响因子: 7.2
• 作者: Karahara, Ichirou;Suda, Jinsuke;Mineyuki, Yoshinobu
• 通讯作者: Mineyuki, Yoshinobu

小胞体の流動機構の解明〜ミオシンに着目して〜

阐明内质网的流动机制 - 以肌球蛋白为中心 -

• 发表时间: 2009
• 作者: 上田晴子;ら
• 通讯作者: ら

An isoform of myosin XI is responsible for the translocation of endoplasmic reticulum in tobacco cultured BY-2 cells.

• DOI: 10.1093/jxb/ern280
• 发表时间: 2009
• 期刊: Journal of experimental botany
• 影响因子: 6.9
• 作者: Yokota E;Ueda S;Tamura K;Orii H;Uchi S;Sonobe S;Hara-Nishimura I;Shimmen T
• 通讯作者: Shimmen T