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牛脾臓プロテアソームおよびユビキチン関連酵素システムの複合体構造研究

牛脾蛋白酶体及泛素相关酶系统复杂结构研究

基本信息

批准号：
17053011
负责人：
森本幸生
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

哺乳類のプロテアソームは14種のヘテロサブユニット28個から成る分子量75万の多機能タンパク質分解酵素複合体であり免疫応答系システムでもある。ここでは免疫型プロテアソームを牛脾臓から抽出し、またユビキチン付加によって分解シグナルを持った基質タンパク質およびユビキチン活性化酵素のユビキチンを介した強固な複合体形成機構を解明することを目的とした。そのために放射光による結晶構造解析を行い、粒子全体の動き、様態については中性子散乱を用いた。牛脾臓2Kgから20Sプロテアソームの精製を行い、最終精製試料約20mgを得た。動的光散乱によってサンプルの分散性を確認し結晶化を行った。MPDを沈殿剤とし、Mg存在下で0.02mm程度の透明板状結晶を得た。これは板状晶が何枚も重なったものでそれをはがしてSPring8蛋白研BLにて回折実験を行った。分解能は約4Åまで観測できたが、回折斑点が割れており、構造解析に至る全データ収集には至らなかった。ユビキチン活性化・接合酵素についてはそれぞれマウス由来E1、ヒト由来E2について、昆虫細胞、大腸菌によって発現させ、精製・結晶化を行った。全長1100残基からなるE1についてはPEGを沈殿剤として針状晶が得られた。放射光による回折実験では分解能8Åの反射が得られたが、これ以上の分解能でのデータ収集には至っていない。E2については25Kフラグメントとして200残基からなる試料として結晶化を行った。PEGを沈殿剤として柱状晶が得られ回折データ収集を行った。分解能は3Åであり2量体として構造決定した。この2量体は生理活性状態とは無関係な会合であると考えられ、現在精密化を進めるとともに、さらに高分解能データ収集に向けた結晶化を行っている。これらとともにタンパク質の凝集過程を超遠心分析、X線・中性子散乱法によって明らかにするため実験、解析を行い、粒子形状およびその解析方法などを考察した。

In mammalian animals, 28 mice with a molecular weight of 750000 were used to immunize the complex of proteolytic enzymes. In the immune system, the spleen was extracted from the bovine spleen, and the spleen was extracted from the bovine spleen. In this way, the spleen of the cow was extracted, and the spleen was extracted from the bovine spleen. In this way, the spleen was extracted from the spleen of the bovine spleen, and the spleen was extracted from the bovine spleen. The gene was extracted from the bovine spleen. The radiation spectrum analysis results show that the analysis line, the whole particle behavior, the status of the neutrons are scattered and the neutrons are scattered. Beef spleen 2Kg

项目成果

期刊论文数量（4）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Crystallization and preliminary X-ray diffraction study of L-lactate oxidase (LOX), R181M mutant, from Aerococcus viridans

草绿色气球菌 L-乳酸氧化酶 (LOX) R181M 突变体的结晶和初步 X 射线衍射研究

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Acta.Crystallography F61
影响因子：
0
作者：
Y.Umena;et al.
通讯作者：
et al.

Conformational Changes in the α-subunit coupled to binding of the β2-subunit of tryptophan synthase from Escherichia coli : Crystal structure of tryptophan synthase α-subunit alone.

与大肠杆菌色氨酸合酶 β2 亚基结合偶联的 α 亚基构象变化：单独色氨酸合酶 α 亚基的晶体结构。

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Biochemistry 44
影响因子：
0
作者：
K.Nishio;et al.
通讯作者：
et al.

Structure of a cyanobacterial BLUE protein, TII0078, containing a novel FAD-binding blue light sensor domain

蓝藻蓝色蛋白 TII0078 的结构，含有新型 FAD 结合蓝光传感器结构域

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
J.Molecular Biology 349
影响因子：
0
作者：
A.Kita;et al.
通讯作者：
et al.

タンパク質のX線構造解析

蛋白质的 X 射线结构分析

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
ぶんせき 8
影响因子：
0
作者：
A.Kita;et al.;森本幸生
通讯作者：
森本幸生

DOI：
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通讯作者：
森本幸生