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微生物毒素の生体膜侵入と複合体形成

生物膜入侵与微生物毒素的复杂形成

基本信息

批准号：
17053019
负责人：
北田栄
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

Becillus thuringiensisが生産する細胞毒素(パラスポリン2)は、特定の培養がん細胞に存在する受容体と結合の後、脂質ラフトで毒素オリゴマーを形成し、細胞膜に傷害を与えていると考えられる。我々はこの細胞孔形成毒素に関して次の二つの問題解決に向けて研究を行った。(1)パラスポリン2による特異的な細胞認識の分子・原子機構(2)パラスポリン2の生体膜への挿入とオリゴマー形成の分子・原子機構研究代表者は分担者と共向で、重原子同型置換法と多波長異常分散法を併用することによってパラスポリン2結晶系の位相決定に成功し、電子密度上で分子モデルの構築からパラスポリン2の単量体立体構造を決定した。パラスポリン2はβシートに非常に富んだ構造をしており、多量化の際これらがβバレルを形成し膜に孔を形成している可能性も考えられる。また、結晶中の単位格子内には12分子のパラスポリン2が会合しており、これが約100Åの中空をもつらせん構造を形成していた。一方、生化学的解析から毒素オリゴマーはSDS電気泳動上では約200kDaと推測されたが、SDS電気泳動では非生理的な操作(界面活性剤と熱処理)を加えるため、生体膜上での確かな分子サイズや構造は不明であった。そこで、温和な界面活性剤(オクチルグリコシドやドデシルマルトシド)で可溶化された毒素オリゴマーを未変性ゲル電気泳動解析(Blue-Native PAGE)によって検出したところ、600〜1000kDaの大きな複合体を形成していることが示唆された。さらにタグを導入した毒素分子を用いて毒素複合体のアフィニティー精製に成功した。現在、原子間力顕微鏡を用いてこの超分子毒素複合体の構造解析を行っている。

After the combination of cytotoxin (cytotoxin 2) and specific cytotoxin (Becillus thuringiensis), the formation of cytotoxin, cell membrane damage and cell membrane damage were studied. We will try to solve the problem of the formation of toxins in the pores of the cells. (1) the molecular atomic organization (2) the molecular membrane is involved in the formation of the molecular atomic mechanism, the heavy atom isomorphism method, the multi-wavelength constant dispersion method is used to determine the phase of the crystal system. In terms of electron density, the molecular density is determined by the molecular mass measurement. We are very rich in the formation of membrane holes, the possibility of the formation of membrane holes, and the possibility of multi-quantification. In the lattice of the crystal, the 12 molecules in the lattice are connected with each other, and the temperature is about 100%. The structure of the structure is formed by the formation of the molecule. On the one hand, biochemical analysis showed that the molecular weight of SDS electrophoresis was determined by 200kDa assay, the non-physiological operation of SDS electrophoresis (interfacial activity assay) was added, and the molecular assay was confirmed on the body membrane. The results show that the complex of 600 ~ 1000kDa complex with high temperature (600 ~ 1000kDa) can be dissolved in the presence of high molecular weight, mild and mild interfacial activity (Blue-Native PAGE). The complex of 600 ~ 1000kDa shows the formation of a complex of high molecular weight. The toxin molecule was inserted into the toxin molecule and the toxin complex was successfully inserted. At present, the atomic force microarray is used to analyze and analyze the supramolecular toxin complex.