GTP結合型低分子量GTPaseの細胞内局在の網羅的解析

GTP结合低分子量GTP酶细胞内定位的综合分析

• 批准号: 18016018
• 负责人: 佐藤 孝哉
• 金额: $ 5.25万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18016018/
• 关键词: Rac1; Ras; Rap1; インスリン; 骨格筋; 糖取り込み; エンドサイトーシス; インテグリン

各種Rasファミリー、Rhoファミリー分子の多重染色法に関しては、複数の結合ドメインについて異なるタグをもつプーローブを各種用意した。これらを用いてRasが活性化している癌細胞株などにおいて活性化部位の二重染色を行ない、活性化部位の詳細な検討を進めた。本研究で確立した内在性Rac1の活性化部位の可視化技術の組織への応用としては、まず骨格筋細胞におけるインスリン刺激に応答した糖取り込み誘導のシグナル伝達系におけるRac1の機能解析を進めた。昨年度までに未分化筋細胞株L6を用いて解析を進めてきたが、今年度は低血清濃度下で分化誘導した筋管においても、インスリン刺激した際の糖取込みの誘導において、Rac1の活性化が必要十分であることを示した。内在性Rac1の活性化部位の可視化技術を応用して、細胞表面のラッフル膜上でRac1の活性化が起こることを示した。細胞内部位特異的に活性化されたRac1によるトランスフェリン受容体および上皮増殖因子受容体のクラスリン依存性エンドサイトーシスの抑制機構についても昨年度に引き続き解析を進めた。本研究で開発したRac1の活性化部位の検出法を応用して、核周辺領域で活性化されるRac1が、受容体エンドサイトーシスを抑制する機構の解析を行なった。また、Rasファミリーの一種であるRap1を介するリンパ球のインテグリン依存性接着の制御系において機能するグアニンヌクレオチド交換因子(RA-GEF-2)の活性調節機構を検討した。さらに、この分子と類縁のRA-GEF-1が胎生期の血管形成に関与する可能性に関する検討を進め、RA-GEF-1ノックアウトマウスと野生型マウスの尿膜におけるRap1の活性化状態を比較、検討した。

Various Ras, Rho, and Rho molecules are used for multiple staining methods. The double staining of the activated site and the detailed analysis of the activated site were carried out in the cancer cell line. This study aims to establish the application of tissue visualization techniques for the active sites of intrinsic Rac1 and to further the functional analysis of Rac1 in response to cellular stimuli. In the past year, undifferentiated tendon cell line L6 has been analyzed for differentiation. In this year, differentiation of tendon cells has been induced at low serum concentrations. In addition, Rac1 activation has been shown to be necessary. Visualization of the active site of intrinsic Rac1 was used to demonstrate the activation of Rac1 on the surface of cells. Cell site-specific activation of RAC1 receptor and epithelial growth factor receptor dependent inhibition mechanism In this study, we developed a method for identifying the active sites of Rac1, and analyzed the mechanisms for inhibiting the activation of Rac1 in the nuclear domain. The activity regulation mechanism of RA-GEF-2 is discussed in detail. In this paper, we compared and investigated the activation status of RAP1 in urine membrane of RA-GEF-1 wild type and RA-GEF-1 related to angiogenesis in fetus.

项目成果

Essential role of Epac2/Rap1 signaling in regulation of insulin granule dynamics by CAMP

• DOI: 10.1073/pnas.0707054104
• 发表时间: 2007-12-04
• 期刊: PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA
• 影响因子: 11.1
• 作者: Shibasaki, Tadao;Takahashi, Harumi;Seinon, Susumu
• 通讯作者: Seinon, Susumu

Phospholipase Cε guanine nucleotide exchange factor activity and activation of Rap1

磷脂酶 Cε 鸟嘌呤核苷酸交换因子活性和 Rap1 的激活

• 发表时间: 2006
• 期刊: Methods in Enzymology 407巻(印刷中)
• 作者: Takaya Satoh;et al.
• 通讯作者: et al.

Role of the Guanine Nucleotide Exchange Factor Ost in Negative Regulation of Receptor Endocytosis by the Small GTPase Rac1*

• DOI: 10.1074/jbc.m700950200
• 发表时间: 2007-08
• 期刊: Journal of Biological Chemistry
• 影响因子: 4.8
• 作者: Katsuaki Ieguchi;Shuji Ueda;T. Kataoka;T. Satoh

Ras and Rap1 activation of phospholipase Cε lipase activity

Ras 和 Rap1 激活磷脂酶 Cε 脂肪酶活性

• 发表时间: 2006
• 期刊: Methods Enzymol. 第407巻
• 作者: 岩根敦子;上田昌宏;日比野佳代;佐甲靖志;柳田敏雄;Hironori Edamatsu
• 通讯作者: Hironori Edamatsu

筋細胞のインスリンシグナル伝達におけるRac1の機能解析.

Rac1 在肌肉细胞胰岛素信号传导中的功能分析。

• 发表时间: 2007
• 作者: 黒木陽子;藤山秋佐夫;黒木陽子;Katsuaki Ieguchi;Yoko Yoshikawa;Ping Wei;Tadao Shibasaki;Takaya Satoh;Hironori Edamatsu;上田修司
• 通讯作者: 上田修司