GTP結合型低分子量GTPaseの細胞内局在の網羅的解析

GTP结合低分子量GTP酶细胞内定位的综合分析

• 批准号: 18016018
• 负责人: 佐藤 孝哉
• 金额: $ 5.25万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18016018/
• 关键词: Rac1; Ras; Rap1; インスリン; 骨格筋; 糖取り込み; エンドサイトーシス; インテグリン

各種Rasファミリー、Rhoファミリー分子の多重染色法に関しては、複数の結合ドメインについて異なるタグをもつプーローブを各種用意した。これらを用いてRasが活性化している癌細胞株などにおいて活性化部位の二重染色を行ない、活性化部位の詳細な検討を進めた。本研究で確立した内在性Rac1の活性化部位の可視化技術の組織への応用としては、まず骨格筋細胞におけるインスリン刺激に応答した糖取り込み誘導のシグナル伝達系におけるRac1の機能解析を進めた。昨年度までに未分化筋細胞株L6を用いて解析を進めてきたが、今年度は低血清濃度下で分化誘導した筋管においても、インスリン刺激した際の糖取込みの誘導において、Rac1の活性化が必要十分であることを示した。内在性Rac1の活性化部位の可視化技術を応用して、細胞表面のラッフル膜上でRac1の活性化が起こることを示した。細胞内部位特異的に活性化されたRac1によるトランスフェリン受容体および上皮増殖因子受容体のクラスリン依存性エンドサイトーシスの抑制機構についても昨年度に引き続き解析を進めた。本研究で開発したRac1の活性化部位の検出法を応用して、核周辺領域で活性化されるRac1が、受容体エンドサイトーシスを抑制する機構の解析を行なった。また、Rasファミリーの一種であるRap1を介するリンパ球のインテグリン依存性接着の制御系において機能するグアニンヌクレオチド交換因子(RA-GEF-2)の活性調節機構を検討した。さらに、この分子と類縁のRA-GEF-1が胎生期の血管形成に関与する可能性に関する検討を進め、RA-GEF-1ノックアウトマウスと野生型マウスの尿膜におけるRap1の活性化状態を比較、検討した。

关于各种RAS和RHO家族分子的多种染色方法，制备了具有不同标签的各种预言。使用这些，激活位点的双重染色是在激活RAS的其他部位中进行的，并对激活位点进行了详细检查。作为在本研究中建立的内源性RAC1激活位点可视化的技术的应用，我们首先在糖摄取的糖摄取信号系统中对Rac1进行了功能分析，以响应骨骼肌细胞中的胰岛素刺激。直到去年，我们一直在使用未分化的肌肉细胞系L6进行分析，今年我们已经表明，Rac1的激活是必要的，足以诱导在低血清浓度下在肌动物中分化的胰岛素刺激时诱导糖摄取。使用内源性Rac1激活位点的可视化技术，我们表明Rac1的激活发生在细胞表面荷叶边膜上。我们还继续分析通过细胞内特异性活化的RAC1抑制转铁蛋白受体和表皮生长因子受体的内吞作用的机制。使用检测本研究中RAC1激活位点的方法，我们分析了在核周围地区激活的Rac1抑制受体内吞作用的机制。我们还研究了鸟嘌呤核苷酸交换因子（RA-GEF-2）的活性调节机理，该动作在控制淋巴细胞整合素依赖性粘附的系统中，通过Rap1（一种RAS），这是一种RAS家族。此外，我们研究了相关分子RA-GEF-1可能参与胚胎血管生成的可能性，并比较并检查了RAP1在RA-GEF-1基因敲除小鼠和野生型小鼠的Allantoic Allantoics中Rap1的激活状态。

项目成果

Phospholipase Cε guanine nucleotide exchange factor activity and activation of Rap1

磷脂酶 Cε 鸟嘌呤核苷酸交换因子活性和 Rap1 的激活

• 发表时间: 2006
• 期刊: Methods in Enzymology 407巻(印刷中)
• 作者: Takaya Satoh;et al.
• 通讯作者: et al.

Defective vascular morphogenesis and mid-gestation embryonic death in mice lacking RA-GEF-1.

缺乏 RA-GEF-1 的小鼠血管形态发生缺陷和妊娠中期胚胎死亡。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Biochem. Biophys. Res. Comm. 363
• 作者: Wei;P.;Satoh;T.;Edamatsu;H.;Aiba;A.;Setsu;T.;Terashima;T.;Kitazawa;S.;Nakao;K.;Yoshikawa;Y.;Tamada;M.;Kataoka;T.
• 通讯作者: T.

Cellular Signaling : New Research

细胞信号传导：新研究

• 发表时间: 2006
• 作者: Uyemura;T.;Takagi;H.;Yanagida;T.;Sako;Y.;Makoto Tadano;佐甲靖志;Takaya Satoh
• 通讯作者: Takaya Satoh

Ras and Rap1 activation of phospholipase Cε lipase activity

Ras 和 Rap1 激活磷脂酶 Cε 脂肪酶活性

• 发表时间: 2006
• 期刊: Methods Enzymol. 第407巻
• 作者: 岩根敦子;上田昌宏;日比野佳代;佐甲靖志;柳田敏雄;Hironori Edamatsu
• 通讯作者: Hironori Edamatsu

筋細胞のインスリンシグナル伝達におけるRac1の機能解析.

Rac1 在肌肉细胞胰岛素信号传导中的功能分析。

• 发表时间: 2007
• 作者: 黒木陽子;藤山秋佐夫;黒木陽子;Katsuaki Ieguchi;Yoko Yoshikawa;Ping Wei;Tadao Shibasaki;Takaya Satoh;Hironori Edamatsu;上田修司
• 通讯作者: 上田修司