Dblファミリーヌクレオチド交換因子の機能解析

Dbl家族核苷酸交换因子的功能分析

• 批准号: 13216072
• 负责人: 佐藤 孝哉
• 金额: $ 2.88万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13216072/
• 关键词: GEF; Db1ファミリー; GTP結合蛋白質; Rhoファミリー; Cdc42; ACK-1

RhoファミリーGTP結合蛋白質に対するグアニンヌクレオチド交換因子(GEF)であるDblファミリー蛋白質は、細胞骨格系の再構成や特異的な遺伝子発現の制御を介して、種々の細胞機能を調節しているが、その分子機構には不明の点が多い。本研究課題では、Dblに注目し、上流からの刺激に応答したRhoファミリーGTP結合蛋白質の活性調節機構を解析した。また、機能や特異性が未知である数種類のDb1ファミリー蛋白質について、生化学的、細胞生物学的解析を行なっている。まず、Db1に関しては、Cdc42の標的分子であるACK-1チロシンキナーゼによりリン酸化され、その結果、RhoA、Racl、Cdc42に対するGEF活性が上昇することが見いだされている。一方ACK-1は、アダプター分子Grb2を介して上皮成長因子レセプター(EGF-R)と会合することが知られているので、EGF-Rの下流でのDblの機能を詳細に検討した。その結果、EGF刺激によって、ACK-1およびDb1のチロシンリン酸化が誘導され、その際、EGF-Rの下流でCdc42、Grb2が関与することが明らかとなった。これに伴って、Dblが活性化され、RhoA、Rac1、Cdc42を介して、アクチン細胞骨格系の再構成が誘導された。以上の結果より、チロシンリン酸化によるDblの活性調節が、EGF-Rの下流で実際に機能していることが強く示唆された。一方、PCR法を用いたクローニングの過程で、Db1の近縁分子には、多くのスプライスバリアントが存在することも明らかとなった。現在、Sec14ドメインやSH3ドメインなど、活性調節に関与すると考えられるドメインの機能を検討している。また、解析を進めている何種類かの分子がHeLa細胞において、Db1とは異なる細胞骨格系の変化を誘導することなどを確認しており、今後その特異的な生理機能を明らかにしていく予定である。

Rho GTP binding proteins are involved in the regulation of cell function, and there are many unknown molecular mechanisms involved in the regulation of cell function. This study aims to analyze the regulatory mechanism of GTP binding protein activity in response to Dbl and upstream stimulation. The functional specificity is unknown, and several kinds of protein, biochemical, and cell biological analyses are performed. The target molecules of RhoA, Racl and Cdc42 were found to increase GEF activity. The function of Dbl downstream of EGF-R is discussed in detail. The results showed that EGF stimulation, ACK-1 and Db-1 were induced by ACD, and EGF-R downstream Cdc42 and Grb2 were induced by ACD. The activation of Dbl, RhoA, Rac1, Cdc42, and the re-formation of the skeletal system of the cells were induced. As a result, the activity of Dbl and EGF-R in the downstream were regulated and the activity of EGF-R was enhanced. One way, PCR method to use the middle of the process, Db 1 of the near molecular, many of the different species of the existence of the same. Now, Sec. 14, SH. 3, Activity Regulation, and Function Review. To identify, analyze, and determine what kinds of molecules are involved in the induction of changes in the cellular skeleton of HeLa cells, Db1, and Db1, and to identify and determine specific physiological functions in the future.

项目成果

Kato-Stankiewicz, J.: "Epidermal growth factor stimulation of the ACK1/Db1 pathway in a Cdc42 and Grb2-dependent manner"Biochem. Biophys. Res. commun.. 284・2. 470-477 (2001)

Kato-Stankiewicz，J.：“以 Cdc42 和 Grb2 依赖性方式刺激 ACK1/Db1 途径”Biochem.Res. 284・2。

Liao, Y.: "RA-GEF-1, a guanine nucleotide exchange factor for Rap1, is activated by translocation induced by association with Rapl・GTP and enhances Rap1-dependent B-Raf activation"J. Biol. Chem.. 276・30. 28478-28483 (2001)

Liao, Y.：“RA-GEF-1 是 Rap1 的鸟嘌呤核苷酸交换因子，通过与 Rapl·GTP 结合诱导的易位而被激活，并增强 Rap1 依赖性 B-Raf 激活”J. Biol. 276· 30. 28478-28483 (2001)

Jin T.: "Role of the CDC25 homology domain of phospholipase Cε in amplification of Rap1-dependent signaling"J. Biol. Chem.. 276・32. 30301-30307 (2001)

Jin T.：“磷脂酶Cε的CDC25同源结构域在Rap1依赖性信号放大中的作用”J. Biol. 276・32 (2001)。

Gao, X.: "Identification and characterization of RA-GEF-2, a Rap guanine nucleotide exchange factor that serves as a downstream target of M-Ras"J. Biol. Chem.. 276・45. 42219-42225 (2001)

高，X.：“RA-GEF-2（一种作为 M-Ras 下游靶标的 Rap 鸟嘌呤核苷酸交换因子）的鉴定和表征”J. Chem. 276・45 (2001)。

Song, C.: "Regulation of a novel human phospholipase C, PLCε, through membrane targeting by Ras"J. Biol. Chem.. 276・4. 2752-2757 (2001)

Song, C.：“通过 Ras 膜靶向调节新型人磷脂酶 C，PLCε”J. Biol. 276・4 (2001)。