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活性型低分子量GTPaseの細胞内局在の網羅的定量解析技術の開発とその応用

活性低分子GTP酶细胞内定位综合定量分析技术开发及其应用

基本信息

批准号：
20016016
负责人：
佐藤孝哉
金额：
$ 4.74万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20016016/
关键词：
Rac1 Rho Rap1 インスリン骨格筋糖取り込み血管形成中心体 Racl Ras Rapl

项目摘要

本年度は、これまでに我々が確立した内在性Rac1およびRap1の活性化の可視化技術を応用して、これらの分子が担う生理機能の解析を推進した。まず、昨年度に引き続き、骨格筋細胞におけるインスリン刺激に応答した糖取り込み誘導のシグナル伝達系におけるRac1の機能解析を行った。具体的には、骨格筋特異的rac1ノックアウトマウスとコントロールマウスにおいて、蛍光標識したGLUT4レポーターを用いたインスリン応答性のアッセイを行った。その結果、骨格筋特異的rac1ノックアウトマウスにおいては、インスリンを尾静注することによって誘導されるGLUT4の細胞膜移行が完全に抑制されたが、活性型変異体Rac1による移行は阻害されなかった。本年度は別の種類の(遺伝子型が異なる)コントロールマウスにおいてもインスリン応答性に異常のないことを確認した。これらの結果より、インスリン刺激した際のマウス骨格筋での糖取込みの誘導において、Rac1の活性化が必要十分であることが強く示唆された。また、rac1ノックアウトマウスでは、インスリン応答性のAktやAS160のリン酸化には異常は認められず、この経路はRac1を介する系とは独立であることが示唆された。さらに、Rac1の活性化部位の可視化技術をマウスの骨格筋に応用し、インスリン応答性のRac1活性化部位を同定する手法の開発も進めた。一方、RhoAに対するGEFであるARHGEF10の細胞周期調節系における役割の検討も進めた。siRNAによってこの分子をノックダウンすると、中心体の複製に異常が生じ、分裂装置が多極化することが明らかとなった。したがって、ARHGEF10は、RhoAを介して、中心体の過剰な複製を抑制していると考えられる。

This year, we have been able to establish the intrinsic Rac1 and Rap1 activation visualization techniques and to advance the analysis of their molecular physiological functions. The function analysis of Rac1 in the cell culture system induced by glucose and glucose was performed. Specific, grid specific rac1 As a result, the cell membrane migration of GLUT4 was completely inhibited by intravenous injection of cell-specific rac1 and blocked by active-type rac1. This year, we have confirmed that there are different kinds of abnormal diseases in the world. The results of this study are as follows: (1) The activation of Rac1 is necessary for the induction of Rac1. Rac1 is an independent system that is capable of responding to the needs of the Akt AS160. In addition, the visualization technology of the active site of Rac1 has been developed to improve the application of the active site of Rac1. The cell cycle regulatory system of ARHGEF10 is developed in response to RhoA. SiRNA is a molecular molecule that is capable of producing multiple copies of the centrosome. ARHGEF10, RhoA, Centrosome and Over-replication