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樹状突起スパインへの選択的蛋白集積メカニズムに関する研究

树突棘选择性蛋白质积累机制研究

基本信息

批准号：
18021004
负责人：
白尾智明
金额：
$ 4.61万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

樹状突起スパインの蛋白組成はシャフト部とは大きく異なっており、スパインは独特な選択的蛋白集積機構を持つと考えられる。我々はこれまでの研究で、神経細胞特異的アクチン結合蛋白ドレブリンAのシナプス後部への集積がアクチンフィラメント、Homer、PSD-95等のスパイン機能に重要な分子の集積を促進するばかりでなく、NMDA受容体集積の恒常性維持的可塑性に必要なことを示した。本研究では、これらの現象に関わる分子の全体像を解明するために、yeast two hybridシステムを用いてドレブリン結合蛋白の探索を行った。平成19年度の研究で、ドレブリンA分子のN末端には、既知のリン酸化酵素および新規蛋白スパイカー結合することが判った。リン酸化酵素に関しては、myc標識リン酸化酵素とHA標識ドレブリンAを線維芽細胞および初代培養神経細胞に発現させると共局在した。また、抗体用いて神経細胞を二重染色するとスパインでの共局在像が得られた。さらに、myc標識リン酸化酵素とHA標識ドレブリンAを線維芽細胞に共発現させてから、その抽出液をHA抗体で免疫沈降すると、myc標識リン酸化酵素が共沈した。以上より、ドレブリンAと当該リン酸化酵素はスパインで直接結合していることがわかり、スパインでのカルシウム依存的細胞骨格構築変化メカニズムの一端をになう可能性が示唆された。一方、新規蛋白スパイカーに関しては、(1)スパイカーの核外における分布はドレブリン依存的である。(2)スパイカーはドレブリン非依存性のスパイン局在配列を持つ。(3)スパイカーは核移行シグナル(NLS)と核外移行シグナル(NES)を持つ。(4)スパイカーをノックダウンするとスパイン密度が減少することが示唆された。

The protein composition of dendrites is different, and the protein accumulation mechanism of dendrites is different. In response to these studies, we have demonstrated that the accumulation of neurocell-specific receptor protein A, Homer, PSD-95 and other functional molecules is essential for promoting the accumulation of important molecules and for maintaining the plasticity of NMDA receptor accumulation constancy. In this study, we explored the molecular whole picture of these phenomena and the application of these proteins to the study of molecular binding proteins. The N-terminal part of the protein A molecule was identified in the study of Heisei 19. The expression of myc, my The antibody was used to double stain the neurons. In addition, myc marker enzyme and HA marker enzyme were co-produced in cell culture, and HA antibody was co-produced in extract. When the enzyme is directly combined with the enzyme, the possibility of the enzyme's transformation into A cell-dependent skeleton is demonstrated. A new type of protein is required.(1) A new type of protein is required. (2)The number of entries in the list is not dependent. (3)NLS and NES are the two main types of nuclear migration. (4)The number of visitors to the site has been reduced.