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新規蛋白スパイカーによるスパイン形成制御機構の解明

使用新型蛋白质尖峰阐明脊柱形成控制机制

基本信息

批准号：
20021002
负责人：
白尾智明
金额：
$ 4.86万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

樹状突起スパインを構成する蛋白群がどのようにしてスパインへ選択的に集積するかは、スパイン機能を解明する上で非常に重要である。本研究では、ドレブリンに結合する新規蛋白スパイカーのスパイン形成に関する機能を明らかにした。Spikarは非神経細胞では主に核のみに存在するが、神経細胞では細胞質特に樹状突起スパインに強く局在している。非神経細胞におけるSpikarとドレブリンの共発現実験により、Spiakrが細胞質に出現するためには、ドレブリンと結合していることが必要であることが示唆された。次に、神経細胞でのSpikarの機能を探るため、Spikarの発現亢進および抑制実験を行った。まず、Spikarの核移行シグナルにミューテーションを導入したところ、核内への移行が阻止されたことより、この部位が核移行シグナルであると結論されたので、核移行シグナルにミューテーションを入れる事により細胞質のみに存在する性質を有するようになったSpikar変異体mNLS-Spikarを作成し、このコンストラクトを培養8日の神経細胞に発現させ、約1週間後にスパイン数を測定したところスパイン数が有意に増加していた。次に、RNAiを用いてSpikarの発現抑制を行った。培養3日後からSpikarの発現を抑制した神経細胞で約2週間後に解析したところ、フィロポディアおよびスパイン数とmEPSC頻度が有意に減少していた。しかし、mEPSCのアンプリチュードやスパイン内へのドレブリンの集積度には変化がないことが示唆された。したがって、Spikarはシナプス誘導には関与するが、一端できあがったシナプスの維持には関与しないことが示唆された。以上より、Spikarは核では転写調節因子として働き、核外(細胞質)ではシナプス形成誘導に関与している新規蛋白であると考えられた。

Dendritic structure of protein groups is very important for understanding the aggregation and function of protein groups. In this study, we found that the function of protein binding was related to the formation of protein. Spikar is not a neurocyte, but a neurocyte with a cytoplasmic dendrimer. Spikar, Spiakr, Cytoplasm, Spikar, Spikar, Spiakr, Spikar, Spikar, Spikar In addition, the function of Spikar in neurons is explored, and Spikar's development is stimulated and inhibited. Spikar's nuclear migration was introduced into and prevented from nuclear migration. The results showed that Spikar's nuclear migration was prevented from nuclear migration. About 1 week later, the number of cases was determined and the number of cases was intentionally increased. The expression of Spikar was inhibited by RNAi. After 3 days of culture, the expression of Spikar was inhibited. After about 2 weeks of culture, the frequency of analysis and mEPSC decreased intentionally. In addition, mEPSC's distribution and distribution within the company's distribution and distribution network are also subject to change. The first step is to establish a relationship between the two parties. The above mentioned factors are related to nuclear and extracellular regulation of protein formation.