1分子イメージングに基づく細胞内動態・解離制御型デリバリーシステムの創製
基于单分子成像的细胞内动力学/解离控制递送系统的创建
基本信息
- 批准号:18038001
- 负责人:
- 金额:$ 2.56万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
- 财政年份:2006
- 资助国家:日本
- 起止时间:2006 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
アデノウイルスと人工ベクター間の遺伝子発現比較を行った結果、同程度の遺伝子発現を示すためには、LipofectAMINE PLUSにおいてはadenovirusと比較して、3桁以上の遺伝子コピー数を必要とすることが明らかとなっている。これまで、両ベクターの細胞内動態を解析した結果、両者の発現効率の大きな差を生み出す要因が、核に移行してから後の効率にあることを明らかとした。そこで本研急では、このような核移行後発現効率がどのようなメカニズムに基づくものであるかを明らかとした。セントラルドグマの中間産物であるmRNAをリアルタイムRT-PCRによって測定することにより、この7000-8000倍にも及ぶ核移行後発現効率差における転写、翻訳過程の寄与を解析した。この結果、転写効率、翻訳効率はそれぞれ400倍及び20倍、アデノウイルスで高い結果が明らかとなった。一方、解離型DNAのみを検出可能な高感度in situ hybridizationを用い、アデノウイルスとプラスミドDNAをTSA増感システムによって高感度に検出した結果、Adの方がLFNと比較して非常に効率的な染色が得られ、LFNの低い核内解離効率が、核移行後の発現効率の低さの原因となる事が示唆された。さらに、アデノウイルスにおいては、ユークロマチンへの特異的な局在が認められた。このような、核内の局在や解離の違いが、核内転写の違いに寄与することが示唆される。さらに、LipofectAMINE PLUSは、細胞内のmRNAと高い静電的相互作用を有し、これが、LFNにおいて低い翻訳効率をしめす一因であることが示唆された。また、リアルタイムイメージングに基づいて細胞内動態を評価した結果、遺伝子は非常にすばやく細胞内でアグリケーションを起こすことを見出し、転写移行後の発現効率の低い大きな要因であることが示唆された。
The results of the comparison of gene occurrence between artificial and artificial genes show that gene occurrence at the same level is necessary for the comparison of gene occurrence between artificial and artificial genes, LipofectAMINE PLUS and adenovirus. The results of the analysis of intracellular dynamics of nuclear migration, nuclear migration and post-nuclear efficiency show that there is a significant difference in the occurrence rate of nuclear migration. This is the first time I've seen a nuclear power plant. The expression of mRNA in the intermediate products of nuclear transformation was analyzed by RT-PCR. The expression of mRNA in the intermediate products of nuclear transformation was 7000-8000 times higher than that in the intermediate products of nuclear transformation. The results, writing efficiency, translation efficiency are 400 times and 20 times higher, and the results are higher. The reasons for the high sensitivity of DNA in situ hybridization, the low dissociation rate of LFN, and the low detection rate after nuclear migration are shown.さらに、アデノウイルスにおいては、ユークロマチンへの特异的な局在が认められた。This is the first time that a nuclear power plant has been operating in a nuclear power plant. LipofectAMINE PLUS is a highly electrostatic interaction between mRNA and LFN. The results of the evaluation of intracellular dynamics in the matrix and the results of the evaluation of intracellular dynamics in the matrix are shown in the table below.
项目成果
期刊论文数量(1)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Quantitative and mechanism-based investigation of post-nuclear delivery events between adenovirus and lipoplex.
- DOI:10.1093/nar/gkl1165
- 发表时间:2007
- 期刊:
- 影响因子:14.9
- 作者:Hama S;Akita H;Iida S;Mizuguchi H;Harashima H
- 通讯作者:Harashima H
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