肺血管標的及び透過型DDSを目的としたナノ粒子のインビボ細胞内動態制御法の確立

肺血管靶向和可渗透 DDS 纳米粒子体内细胞内动力学控制方法的建立

• 批准号: 22689002
• 负责人: 秋田 英万
• 金额: $ 13.15万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (A)
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 2012
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22689002/
• 关键词: 肺; 遺伝子・核酸デリバリー; 細胞内動態制御; トランスサイトーシス

多重パッケージング法の確立に関して、内膜の膜枚数制御を行うために、遺伝子とポリカチオンの凝集体コアをテトラエチレングリコール修飾コレステロール(TEG-Col)含有脂質膜でコーティングした。また、本MENDを2枚目で封入する際には、1枚膜MENDの空リポソームからの精製と長期保存を行うための凍結乾燥技術を確立することが重要である。スクロース密度勾配遠心を行うことにより、遺伝子封入ナノ粒子の精製を行い、さらに本MZNDを凍結乾燥する上で至適なバッファー条件を見出すことに成功した。また、本精製後のMENDは、1枚膜で覆われていることは、電子顕微鏡観察により明らかとした。また、2段階目の封入法の確立についても検討を行った。内膜にビオチン修飾を施し、2段階目のパッケージングに伴うアビジンの内膜への結合阻害効果を指標にパッケージングを評価する方法論を確立した。また、外膜の検討として、肺血管内皮を標的化可能な新規リガンドを探索した。本リガンド修飾リポソームに遺伝子を封入しても、初期の検討においては遺伝子発現がほとんど認められなかったが、細胞内動態(特にエンドソーム脱出)の改良により、in vivo静脈内投与によって効率的な遺伝子発現を示すナノ粒子を構築することに成功した。さらに、本粒子に対して、siRNAを封入することにより、肺血管内皮細胞における効率的な血管投与型遺伝子ノックダウンシステムを構築することに成功した。さらに、新たに脳への標的化リガンドについても探索し、レプチン由来ペプチドが脳毛細血管内皮細胞標的化に有用である事を見出した。細胞内動態の観点からは、リアルタイムイメージングシステムにより、ナノ粒子の細胞質輸送過程を定量的に評価する技術を確立した。

The establishment of the multiple layer coating method is related to the membrane number control of the inner membrane, the aggregation of the inner membrane, the aggregation of the inner membrane, and the aggregation of the inner membrane. It is important to establish the freeze-drying technology for the purification and long-term preservation of MEND when it is encapsulated in 2 items. The density of MZND is matched with that of telecentre. The purification of MZND particles is carried out successfully. The MZND is freeze-dried under the optimum conditions After the purification, a film was formed, and the electron microscope was used to observe the film. 2-stage sealing method is established. A methodology for evaluating the binding resistance effect of the membrane with two-stage membrane modification was established. The study of adventitia and pulmonary endothelial standardization may lead to new development. The present invention relates to an improved method for the detection of gene expression in vivo, which is successful in the construction of gene expression in vivo intravenous administration and gene expression in vivo. In addition, siRNA was successfully encapsulated in pulmonary vascular endothelial cells. In addition, new technologies for standardization of capillary endothelial cells have been developed. A technique for quantitative evaluation of intracellular dynamics and particle transport processes was established.

项目成果

Particle Tracking for Intracellular Trafficking of Octaarginine-Modified Liposome : Comparative Study with Adenovirus

八精氨酸修饰脂质体细胞内运输的粒子追踪：与腺病毒的比较研究

• 发表时间: 2010
• 作者: Akita H;Enoto K;Masuda T;Tani T;Mizuguchi H;Harashima H
• 通讯作者: Harashima H

肺送達のためのベクター、導入剤及び使用

载体、递送剂和肺部递送的用途

• 发表时间: 2011

Particle Tracking of Intracellular Trafficking of Octaarginine-modified Liposomes: A Comparative Study With Adenovirus

• DOI: 10.1038/mt.2010.33
• 发表时间: 2010-05-01
• 期刊: MOLECULAR THERAPY
• 影响因子: 12.4
• 作者: Akita, Hidetaka;Enoto, Kaoru;Harashima, Hideyoshi
• 通讯作者: Harashima, Hideyoshi

Leptin-derived peptide, a targeting ligand for mouse brain-derived endothelial cells via macropinocytosis.

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2010.03.024
• 发表时间: 2010-04
• 期刊: Biochemical and biophysical research communications
• 影响因子: 3.1
• 作者: Mina Tamaru;H. Akita;T. Fujiwara;Kazuaki Kajimoto;H. Harashima

Dynamic analysis and control of intracellular trafficking of gene-encapsulating nano-carrier based on a real-time imaging

基于实时成像的基因封装纳米载体细胞内运输的动态分析与控制

• 发表时间: 2010
• 作者: Nishioka K;Nishida M;Ariyoshi M;Saiki S;Jian Z;Hirano M;Nakaya M;Sato Y;Kita S;Iwamoto T;Hirano K;Inoue R;Kurose H;秋田英万
• 通讯作者: 秋田英万