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培養細胞の顕微鏡下その場観察選別回収法の開発

显微镜下原位观察和收集培养细胞方法的开发

基本信息

批准号：
18048036
负责人：
高松洋
金额：
$ 1.86万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は,ディッシュに培養した細胞を顕微鏡下で観察しながら,タンパク質分解酵素を用いずにターゲットの細胞のみを回収する技術の開発を目的としたものである.この方法では,下限臨界共溶温度(約33℃)以下で水溶性を示す温度応答性化合物をコーティングしたディッシュに細胞を培養し,ターゲット細胞の直下の狭い領域のみを冷却して,脱着した細胞をマイクロピペットで吸引する.本年度は吸引システムへのマイクロバルブの導入,マイクロピペットのアルブミンコーティングなど装置の改良を行った後,上記のディッシュに播種後18時間培養したマウス線維芽細胞3T3の回収実験を行った.また,回収した細胞を顕微鏡下で長期間培養してその様子を観察して以下の成果を得た.1.細胞または細胞塊を10秒以内で確実に回収できるようになった.2.複数個所からの連続回収が容易に行えるようになった.3.回収した細胞の再培養実験から,(1)細胞が再び付着伸展すること,(2)相互接着した細胞は接着を保ったまま再播種できること,(3)再培養した細胞が再び分裂すること,を明らかにし回収による細胞のダメージがないことを証明した.4.赤と緑にそれぞれ蛍光染色した細胞を2種類の細胞とみなし,片方だけに純化するデモンストレーションを行った.この結果,当初の目標を全てクリアして「培養細胞の顕微鏡下その場観察選別回収法」を確立した.

In this study, microscopically, the enzymes were used to analyze the enzymes in this study. In this method, the lower limit of eutectic temperature (about 33 ℃) is below the eutectic temperature (about 33 ℃). The water solubility indicates that the reactive compound is sensitive to the temperature, the cell culture, the temperature, the temperature and the temperature. This year, we will attract customers to join us, and after the improvement of the equipment, the 3T3 will be released 18 hours after the training session. During the long-term training program, the following results have been achieved. 1. Please make sure that you get back to you within 10 seconds. 2. It is easy to copy several unregistered links and return messages. 3. The cells are recultured, (1) the cells are repaid to stretch the cells, (2) the cells are connected to each other, and then the cells are protected and sown again. (3) the cells are divided again, and the cells are clearly displayed. 4. The color of the film is different from that of the cells on the side of the film, which is different from that of the control group. The results showed that at the beginning, it was necessary to make sure that the system was established in the first place.