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分子進化的手法による高性能な蛍光免疫センサーQuenchbody構築法の確立

利用分子进化方法建立高性能荧光免疫传感器Quenchbody构建方法

基本信息

批准号：
22KJ1271
负责人：
井上暁人
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

1. 酵母提示抗体ライブラリを用いた高性能なQ-body選択研究協力者である徳島大学村上博士より分与を受けた30種余りのヒト血清アルブミン結合ナノ抗体を材料に，これらをコイルドコイル形成ペプチドE4と融合して酵母細胞表面で提示させ，外部からFITC-TAMRA標識コイルドコイル形成ペプチドK4を付加してQ-body化し，抗原応答の高いQ-bodyを選択した。この結果得られた，抗原依存的蛍光応答の高いクローンは，大腸菌で発現させてQ-body化しても他のクローンより高い応答を示した。さらに酵母表面やビーズ上で蛍光応答が向上することが新たにわかり、これらの本研究成果をまとめて論文発表を行った(Sci. Rep.)。2. ランダムなトリプトファン残基挿入によるQ-body応答の向上1で選択されたナノ抗体をテンプレートとし、その超可変領域(CDR)のチロシン残基にトリプトファン残基をランダムに導入したライブラリから抗原結合能を示し、かつクエンチを示すナノ抗体を選択した。その結果、複数のトリプトファン残基を含む変異体が獲得された。さらに選択された変異体を大腸菌で発現させ、蛍光応答を見ると抗原結合を損なうことなく、より高い応答を示すことが確認され、本手法を用いてナノ抗体を材料としたQ-bodyを分子進化させることに成功した。3. 低分子認識VHHのQ-body応答の向上低分子認識ナノ抗体としてはコルチゾールを認識するナノ抗体を新たなモデルとし、立体構造をもとにCDR1にトリプトファン残基の変異を導入した。その結果、野生型と比べて約2倍の蛍光応答を示すことが確認され、低分子認識ナノ抗体についても分子進化が可能であることが示唆された。

1. Yeast tip antibody high performance Q-body selection research collaborator Dr. Jang Yong University Murakami split and accept 30 kinds of serum binding antibody materials, such as the formation of a variety of E4 fusion yeast cell surface tip, external FITC TAMRA identification of a variety of E4 fusion Q-body transformation Antigen response to high Q-body selection The results show that the antigen-dependent fluorescent protein has a high level of fluorescence, and Escherichia coli has developed a high level of fluorescence due to the transformation of the Q-body into other fluorescent proteins. The results of this study are presented in the paper (Sci. Rep.)。2. The Q-body protein is selected from the group consisting of anti-CDRs, anti-CDRs and anti-CDRs. The results of the study showed that the number of residues in the study group was significantly lower than that in the control group. The method is successful in the detection of foreign coliforms and in the detection of antigen-binding proteins. 3. Low molecular weight recognition of VHH Q-body response to low molecular weight recognition of antibodies to new molecules, stereo structure and CDR1 to different residues introduced The results show that wild-type antibodies are about 2 times more sensitive than wild-type antibodies, and that molecular evolution is possible.