精子幹細胞のニッシェへのホーミングに関わる分子機構の解明

阐明精子干细胞归巢至微环境的分子机制

基本信息

批准号：
18060022
负责人：
篠原美都
金额：
$ 5.12万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

精子幹細胞は血液系幹細胞と同様に、別個体に移植すると自らのニッシェにホーミングし、その組織を再構築できる。研究代表者らはこれまで精子幹細胞の機能解析を行ってきたが、2003年にマウスの精子幹細胞の長期培養系を独自に確立し、これをGermline Stem(GS)細胞と命名した。18年度の研究ではこのGS細胞培養系を用いて、アデノウイルスにより遺伝子操作を行い、conditional knockoutマウスを用いてニッシェに関与する遺伝子をアッセイする方法を確立した。この方法はrecombinationによりbeta-galactosidaseを発現するROSA26-Creレポーターマウスにより精巣細胞を採取し、これにCreを発現するアデノウイルスベクター(AxCANCre)を導入し、幹細胞に感染すればROSA26のプロモーターは精子形成の過程で活性であるため、beta-galactosidaseを発現するというものである。19年度の研究ではこのアッセイ系をもちいてホーミング関連遺伝子のスクリーニングを行った。血液系幹細胞でホーミング関連遺伝子として示唆されている分子群(CXCR-4,c-Kit/SCF,E-cadherinなど)を中心にconditional knockoutマウスからGS細胞を樹立した。さらに上記のアデノウイルスの系を用いて試験管内でCre recombinationによりホモ変異の細胞を誘導して、この細胞を精巣に移植することによりホーミングへの影響を観察した。移植には内因性の精子形成の欠損しているWマウスを用いた。移植後約三ヶ月でホストマウスの精巣を摘出し、LacZ染色を行った結果、一部の分子についてホモ変異GS細胞は野生型に比し顕著にコロニー形成が低下することが分かった。

像血液系统干细胞一样，精子干细胞可以植入单独的物体中，以磨碎自己的生态位并重建组织。直到现在，研究人员一直在对精子细胞进行功能分析，但是在2003年，他们独立地建立了小鼠精子干细胞的长期培养系统，并命名了该种系（GS）细胞。在2018年的研究中，建立了一种使用该GS细胞培养系统对腺病毒进行遗传操作的方法，并使用条件基因敲除小鼠分析了涉及小裂涉及的基因。该方法涉及通过与表达β-半乳糖苷酶的ROSA26-CRE报告者重新组合来收集睾丸细胞，并引入了表达CRE的腺病毒载体（AXCANCRE），在该腺病毒载体（AXCANCRE）中表达CRE表达CRE的腺病毒载体（Axcancre）在其中引入了Sperer，并在Sprister中引入了Sperer，并在STEM细胞中引入了Rosa 2 spiepent，rosa是Rosa26的促进剂的促进剂，该过程是ROSA2的促进剂的启动剂，该过程是Rosa2的启动器。 β-半乳糖苷酶。在2019年的一项研究中，该测定系统用于筛选与归巢相关的基因。从有条件的基因敲除小鼠中建立了GS细胞，主要是由建议在血液系统干细胞（CXCR-4，C-KIT/SCF，E-Cadherin等）中被认为是与归因相关的基因组成的分子。此外，使用上面描述的腺病毒系统，通过在体外CRE重组诱导同型突变细胞，并通过将这些细胞移植到睾丸中观察到对归巢的影响。为了植入，使用缺乏内源性精子发生的W小鼠。植入大约三个月后，除去宿主小鼠的睾丸并进行了LACZ染色，并发现与野生型相比，某些分子的同源GS细胞显着降低了菌落形成。

项目成果

期刊论文数量（16）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Capillary morphogenesis genel (CMG)-1 is among the gones differentially expressed in mouse male germline semudo and Escells

毛细血管形态发生基因 (CMG)-1 是小鼠雄性种系 semudo 和 Escells 中差异表达的基因之一

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
Mol.Reprod.Dev. 73
影响因子：
0
作者：
Lee J.;et. al.;Kanatsu-Shinohara et al.;Kanatsu-Shinohara et al.;Kanatsu-Shinohara et al.;Fujino et al.
通讯作者：
Fujino et al.

Production of knockout mice by gene targeting in multipotent germline stem cells.

DOI：
10.1016/j.ydbio.2007.09.029
发表时间：
2007-12
期刊：
Developmental biology
影响因子：
2.7
作者：
M. Takehashi;Mito Kanatsu-Shinohara;H. Miki;Jiyoung Lee;Y. Kazuki;K. Inoue;N. Ogonuki;S. Toyokuni;M. Oshimura;A. Ogura;T. Shinohara
通讯作者：
M. Takehashi;Mito Kanatsu-Shinohara;H. Miki;Jiyoung Lee;Y. Kazuki;K. Inoue;N. Ogonuki;S. Toyokuni;M. Oshimura;A. Ogura;T. Shinohara

Rats produced by interspecies spermatogonial transpla ntation Oin mice and in utro microinsemination

小鼠和体外显微授精通过种间精原细胞移植产生的大鼠

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
Proc.Natl.Acad.Sci.USA 103
影响因子：
0
作者：
Lee J.;et. al.;Kanatsu-Shinohara et al.;Kanatsu-Shinohara et al.;Kanatsu-Shinohara et al.;Fujino et al.;Kanatsu-Shinohara et al.;Shinohara et al.
通讯作者：
Shinohara et al.

精子幹細胞の多分化能制御に関わる遺伝子デコードプログラムの解明

阐明参与控制精原干细胞多能性的基因解码程序