世代を超えて伝達するエピジェネティック異常のモデル動物の作成

创建代代相传的表观遗传异常模型动物

• 批准号: 21659100
• 负责人: 篠原 美都
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21659100/
• 关键词: 遺伝学; 発生・分化; 幹細胞; バイオテクノロジー

精子幹細胞の長期培養系(Germline Stem :GS細胞)は、2年以上の培養後も精巣内移植により正常な子孫を産生する。胎生期の精巣から樹立された細胞(embryonic Germline Stem : eGS細胞)は、独特のエピジェネティック異常を伴う。本研究ではこれらの細胞の差異に着目し、ヒストン修飾の異常と精子幹細胞のインプリンティング遺伝子の発現制御機構の関わりを調べた。1) ノックアウトマウスやRNAi法によるヒストン修飾酵素欠損eGS細胞、GS細胞の樹立マイクロアレイのデータをもとにGS細胞で発現の高いヒストン修飾遺伝子28個を候補として選び、レンチウイルスにてshRNAによるノックダウンを行った。COBRA法にてH19やIgf2rなどGS細胞のインプリンティング領域のメチル化に変化はなかったが、Ash11, Ash21, Jarid2, Ehmt1, Setd2, Setd3, Chd1遺伝子ノックダウンではGS細胞の増殖や生存に影響を及ぼした。その細胞死がp53に依存するものか否かを調べるためp53欠損GS細胞に同遺伝子のノックダウンを行った結果、Chd1について細胞死をレスキューできた。これはChd1による細胞死がp53遺伝子依存性であることを示唆する。しかしChd1遺伝子をノックダウンされたp53欠損GS細胞においてH19のDNAメチル化に変化は見られなかった。2) eGS細胞の樹立ステージの拡大これまでに用いてきた培地では胎生12.5日以降のPGCからのみeGS細胞の樹立が可能であった。これを改変することにより、胎生8.5-11.5日のPGCの培養を行った。樹立された細胞についてRT-PCR法やフローサイトメトリーにより遺伝子発現パターンを調べるとともに、COBRA法にて調べたインプリンティング遺伝子のメチル化の異常の有無を調べたが、培養細胞においては胎生12.5日以降のPGC由来のものと類似した結果が得られた。

Sperm Stem cell <s:1> long-term culture line (Germline Stem :GS cells), after more than 2 years of <s:1> culture, the によ <s:1> normal な offspring を are transplanted into the sperm nest to produce する. TaiShengQi の fine 巣 か ら set さ れ た cells (embryonic Germline Stem: eGS cells) は, unique の エ ピ ジ ェ ネ テ ィ ッ ク abnormal を う. This study で は こ れ ら の cell に の difference mesh し, ヒ ス ト ン modified の abnormal と sperm cells の イ ン プ リ ン テ ィ ン グ heritage 伝 son の 発 system now royal institution の masato わ り を adjustable べ た. 1) ノ ッ ク ア ウ ト マ ウ ス や RNAi method に よ る ヒ ス ト ン modification enzyme owe damage of eGS cells, GS の set マ イ ク ロ ア レ イ の デ ー タ を も と に GS cell で 発 is の high い ヒ ス ト ン modified heritage 伝 28 を son alternate と し て び, レ ン チ ウ イ ル ス に て shRNA に よ る ノ ッ ク ダ ウ ン を line っ た. COBRA method に て H19 や Igf2r な ど GS cell の イ ン プ リ ン テ ィ ン グ field の メ チ ル change に variations change は な か っ た が, Ash11 Ash21, Jarid2, Ehmt1, Setd2, Setd3, Chd1 posthumous son 伝 ノ ッ ク ダ ウ ン で は GS cell の や に influence を and survival rights colonization ぼ し た. そ の cell death が p53 に dependent す る も の か no か を adjustable べ る た め に p53 owe damage of GS cells with heritage 伝 son の ノ ッ ク ダ ウ ン を line っ た results, Chd1 に つ い て cell death を レ ス キ ュ ー で き た. Youdaoplaceholder0 れ Chd1による cell death がp53 伝 dependency である とを とを とを abetative する. し か し Chd1 posthumous son 伝 を ノ ッ ク ダ ウ ン さ れ た p53 owe damage of GS cell に お い て H19 の DNA メ チ ル change に variations change は see ら れ な か っ た. 2) eGS cell の set ス テ ー ジ の company, big こ れ ま で に with い て き た petty で は viviparous 12.5 days for の PGC か ら の み の eGS cells may establish が で あ っ た. <s:1> れを modification する とによ とによ とによ する, fetal birth 8.5-11.5 days <s:1> PGC <s:1> culture を row った. Establish さ れ た cells に つ い て rt-pcr method や フ ロ ー サ イ ト メ ト リ ー に よ り heritage 伝 son 発 now パ タ ー ン を adjustable べ る と と も に, COBRA に て adjustable べ た イ ン プ リ ン テ ィ ン グ heritage 伝 son の メ チ ル change の abnormal の presence of を adjustable べ た が, culture cell に お い て は viviparous 12.5 days for の PGC origin の も の と similar Youdaoplaceholder0 た result が is られた.

项目成果

Unstable Side Population Phenotype of Mouse Spermatogonial Stem Cells In Vitro

小鼠精原干细胞体外不稳定侧群表型

• DOI: 10.1262/jrd.10-168n
• 发表时间: 2011
• 期刊: Journal of Reproduction and Development
• 影响因子: 1.8
• 作者: 篠原隆司;石井慧;篠原美都
• 通讯作者: 篠原美都

Transmission distortion by loss of p21 or p27 cyclin-dependent kinase inhibitors following competitive spermatogonial transplantation

• DOI: 10.1073/pnas.0914448107
• 发表时间: 2010-04-06
• 期刊: PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA
• 影响因子: 11.1
• 作者: Kanatsu-Shinohara, Mito;Takashima, Seiji;Shinohara, Takashi
• 通讯作者: Shinohara, Takashi

マウス精子幹細胞ニッシェ制御におけるG蛋白質分子の役割の解明

阐明G蛋白分子在小鼠精子干细胞生态位调节中的作用

• 发表时间: 2010
• 作者: 中川嘉;清水英寿;矢部祥子;島野仁;松坂賢;石井清明;高橋昭光;矢藤繁;鈴木浩明;浦山修;山田信博;篠原美都;篠原美都
• 通讯作者: 篠原美都

Large-scale production of growing oocytes in vitro from neonatal mouse ovaries

• DOI: 10.1387/ijdb.082607ah
• 发表时间: 2009-01-01
• 期刊: INTERNATIONAL JOURNAL OF DEVELOPMENTAL BIOLOGY
• 影响因子: 0.7
• 作者: Honda, Arata;Hirose, Michiko;Ogura, Atsuo
• 通讯作者: Ogura, Atsuo

Geneticreconstitution of mouse spermatogonial stem cell self-renewal in vitro by Ras/cyclin D2 activation.

Ras/cyclin D2 激活体外小鼠精原干细胞自我更新的基因重建。

• 发表时间: 2009
• 期刊: Cell Stem Cell 5(1)
• 作者: Lee J.;Kanatsu-Shinohara M.;Morimoto H.;Kazuki Y.;Takashima S.;Oshimura M.;Toyokuni S.;Shinohara T.
• 通讯作者: Shinohara T.