膜タンパク質の局在化と構造形成におけるソフトな相互作用

膜蛋白定位和结构形成中的软相互作用

基本信息

批准号：
19036030
负责人：
木田祐一郎
金额：
$ 4.35万
依托单位：
University of Hyogo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

●アミノ末端側をオルガネラ内腔に配置する膜貫通配列(1型シグナルアンカー(SA-I)配列)の小胞体膜組み込みにおいて、アミノ末端側ドメインは合成完了後に膜透過する。我々は以前に、このドメインにストレプトアビジン(SAv)との親和性の高い配列(SBPタグ)を融合することで、細胞質側に添加したSAvによって膜透過を一時停止できることを報告した。この膜透過はSAvの濃度依存的に阻害されるが、膜透過のSAv感受性から透過駆動力を見積もる実験系を立ち上げ、膜透過におけるSA-I配列の作用を調べた。その結果、SA-I配列へのプロリン残基挿入、及びSA-I配列とISBPタグとの距離を広げることで、透過駆動作用が著しく減少した。これらの結果は、SA-I配列がその上流の一定範囲の膜透過に直接関与する可能性を示している。(Kida et al., JBC 2009)●ミトコンドリア局在と報告されていたABCトランスポーター、ABCB6の培養細胞での動態を解析したところ、小胞体を経由してゴルジ体への局在化が観察された。ABCB6には明確なミトコンドリア標的化シグナルが存在しておらず、これらを総合して実際にはゴルジ体に局在化すると結論した。(Tsuchida et al., BBRC 2008)●我々が構築した膜透過・組み込み中間状態形成技術と、部位特異的に配置させたシステイン残基への化学修飾性からその領域の水環境を検定する方法を組み合わせて、透過途中で停止したポリペプチド鎖の膜内環境を探査した。その結果、トランスロコンにおいて少なくともポリペプチド鎖2本分の親水環境が形成されうることが示され、活性状態では予想以上のキャパシティーを発揮することが示唆された。(Kidaら、投稿準備中)

●在整合跨膜序列的内质网膜（1型信号锚定（SA-I）序列）中，将氨基末端侧放置在细胞器腔中，氨基末端侧域渗透在合成后渗透膜。我们先前报道说，通过将高度亲和力序列与链霉亲和素（SAV）融合到该结构域（SBP标签），可以通过细胞质SAV来阻止膜渗透。这种膜渗透以浓度依赖性的SAV抑制，但是启动了一个实验系统，以估计基于膜渗透的SAV敏感性的渗透驱动力，并研究了SA-I序列对膜渗透的影响。结果，将脯氨酸残基插入SA-I序列中，以及SA-I序列和ISBP标签之间的距离的扩大可显着降低渗透驱动效果。这些结果表明，在其上游范围内，SA-I序列可能直接参与膜渗透的可能性。（Kida等人，JBC 2009）●当ABCB6的动力学（据报道是线粒体定位）在培养的细胞中分析时，观察到通过内质网定位到高尔基体。 ABCB6没有明确的线粒体靶向信号，通过将其结合在一起，我们得出结论，它实际上将其定位于高尔基体。（Tsuchida等，BBRC 2008）●我们将膜通透性和整合中间状态形成技术组合在一起，我们构建了该技术以及一种测试该地区的水性环境的方法，因为其化学修饰与位点特异性放置的cysteine残基，以探索在允许下进行多肽链的内膜环境，以探索允许途中的多肽链中的内膜环境。结果，结果表明，在易位状态下可以形成至少两个多肽链的亲水环境，这表明活性态表现出的能力大于预期。（Kida等人，准备发布）