クラスリン被覆小胞形成の試験管内再構成

网格蛋白包被的囊泡形成的体外重建

• 批准号: 20034046
• 负责人: 亀高 諭
• 金额: $ 1.86万
• 依托单位: Fukushima Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20034046/
• 关键词: リソソーム; クラスリン; ゴルジ体; 選別輸送; ショウジョウバエ; クラスリンアダプター; 試験管内再構成; GGA; LERP

本研究はショウジョウバエの培養細胞系を用いてクラスリン被覆小胞の形成とクラスリン依存的な小胞輸送の素過程を分子レベルで明らかにし、細胞構成要素の発現制御の分子機序に迫ることを目的としている。(1) これまでに動物細胞のクラスリンアダプターGGAs,AP-1複合体のショウジョウバエホモログであるdGGA及びdAP-1複合体及び関連因子のクローニングと性状解析を行い、クラスリン被覆小胞の形成に於いてショウジョウバエが哺乳動物及び出芽酵母と非常によく似たメカニズムを有していることを示し、論文で報告した、また、(2) S2培養細胞系を用いて、リソソームに局在する蛋白質分解酵素の選別受容体Lerpの輸送を生化学的及び細胞生物学的にモニターするアッセイ系を確立し、クラスリンアダプター分子群及びその制御因子であるARF small GTPaseファミリーの分子群が実際にLerpの輸送に関与していることを示すことに成功した。更に、(3) ゴルジ体から形成されるdGGAを含む膜小胞がLerpを含むことを、GFP-dGGA及びmCherry-Lerpを用いた生細胞内観察により示した。(4) 関連因子の生化学的な性状解析を行った後,野生型S2細胞あるいは遺伝子ノックダウン株由来の単離膜及び細胞質フラクション、精製リコンビナント蛋白質を用いたクラスリンの細胞質から膜へのリクルートを試験管内で再構成することに成功した。

In this study, the cultured cell line of Semanae was coated with tetracycline to form tetracytic infusion dependent on tetracycline. The process of sending the element is the molecular structure of the element, and the structure of the cell's constituent elements is the molecular machine sequence and the purpose of the process. (1)これまでにAnimal Cell GGAs, AP-1 Complex GGAs Solution to the traits of バエホモログであるdGGA and びdAP-1 complex and びrelated factors Analysis of the formation of を行い, クラスリン coated cells in いてショウジョウバエが mammals and budding fermentation The mother is very cute, the paper is very similar, the paper is reported, (2) The S2 cultured cell line is used for biochemical and biochemical transport of Lerp, a proteolytic enzyme, and its receptors are used. In cell biology, the にモニターするアッセイ Establishmentし, クラスリンアダプターmolecule group and びそのregulatory factor であるARF The molecular group of small GTPase is the same as Lerp. More, (3) The ゴルジからforms されるdGGAをcontaining membrane cells and がLerpをcontaining むことを, GFP-dGGA and びmCherry-Lerpを were observed in raw cells using いたによりした. (4) After analysis of the biochemical characteristics of the relevant factors, the wild-type S2 cell strain was derived from the isolated membrane and cytoplasmic membrane.ョン, purified リコンビナントprotein を use いたクラスリンのcytoplasm The から film へのリクルートを test tube was reconstructed することに successfully.

项目成果

リソソーム酵素の選別輸送メカニズムの解析

溶酶体酶选择性转运机制分析

• 发表时间: 2010
• 作者: 中村真理子;砂川昌範;小杉忠誠;亀高諭
• 通讯作者: 亀高諭

ショウジョウバエ細胞を用いたクラスリンアダプターの機能解析

使用果蝇细胞进行网格蛋白接头的功能分析

• 发表时间: 2009
• 作者: 亀高諭;和栗聡
• 通讯作者: 和栗聡

Functional characterization of protein sorting machineries at the TGN in the fruit fly, Drosophila melanogaster

果蝇 TGN 蛋白质分选机制的功能特征

• 发表时间: 2009
• 作者: 上山修平;ほか;Sakai H.;亀高諭
• 通讯作者: 亀高諭

ショウジョウバエ細胞を用いたクラスリンアダフターの機能解析

使用果蝇细胞进行网格蛋白接头的功能分析

• 发表时间: 2009
• 作者: 亀高諭;Juan S. Bonifacino;和栗聡;亀高諭
• 通讯作者: 亀高諭

蛋白質核酸酵素(Vbl.53 No.16)p.2046-2052

蛋白核酸酶（Vbl.53 No.16）p.2046-2052

• 发表时间: 2008
• 作者: 大野博司;吉森保(編)
• 通讯作者: 吉森保(編)