マウス胚および配偶子の凍結保存技術の開発研究

小鼠胚胎及配子冷冻保存技术的研发

• 批准号: 62619508
• 负责人: 宮下 信泉
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: National Institute of Genetics
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1987
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1987 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-62619508/
• 关键词: 凍結保存; 胚; 配偶子; 受精卵; 近郊系マウス; 野性マウス

本研究は, 胚(受精卵)および配偶子(精子)の凍結保存法による, 野生由来をも含めたマウスの有用遺伝子および変異遺伝子の保存システムの確立を目的としている.1.受精卵の凍結保存:代表的な標準近交系マウス数系統において受精卵の凍結保存を試みた. 8細胞期の受精卵を, グリセリンを凍結保護剤として, プログラムフリーザーを用いた修正緩慢凍結法により冷却・凍結させた. 融解は室温水中で急速融解を行ない, 一定時間培養後, 発生状態を観察した. このうち正常に発生した胚を偽妊娠雌マウスの子宮内に移植し, 新生仔への発育を調べた. 結果として, 代表的な近交系マウスにおいては, 移植卵の約20ないし40%が正常な新生仔として蘇生したことから, 同法によるマウス系統の受精卵による維持保存が可能であることが判明した. さらに, アジア産野生マウス(Mus musculus molossinus)由来の系統において, 同様に新生仔を得ることができたことから, 有用な変異遺伝子の供給源となりうる野生マウスにおいても, 受精卵による保存が実用性のあることが示唆された.2.精子の凍結保存:目的とする有用遺伝子および突然変異遺伝子の保存に重点をおいた場合, 精子の凍結保存によるハプロイドのゲノムの保存も有用性が高い. 種々の凍結保護剤を比較検討した結果, 18%ラフィノースおよび3%スキムミルクを用いた場合, 数ヶ月間凍結後融解した精子においては, 野生マウスも含めた近交系マウスにおいて20%から45%の生存率を示すことが判明した. さらに受精能を獲得させた後, ホルモン処理により強制排卵させた雌マウスに対して人工受精を行なった結果, 新生仔を得ることができた. 今後, 凍結保存しておいた精子と, 過排卵処理によって得た末受精卵を体外受精させ, 受精卵を得ることにより, 産仔を得る技術を開発する予定である.

In this study, embryos (fertilized eggs), gametes (sperm), gametes (sperm), wild origin, wild origin, sperm, sperm Zygote preservation: the representative standard inbred system, numerical system, zygote, zygote and zygote. The zygote in the 8-year-old cell stage, the fertilized egg, the fertilized egg and the fertilized egg. After a certain period of time, the temperature in the room temperature water was rapidly melted and incubated for a certain period of time. The baby was born normally, the embryo was born, the pregnant female was implanted, and the newborn baby was born. Results the results showed that the inbred lines represented by the inbred line were successful, and about 20% of the eggs were transferred. 40% of the normal newborn babies were born in the same way, and the fertilized eggs were preserved in the same way. The origin of the wild baby baby (Mus musculus molossinus) is the history of the system, and the newborn baby of the same family is given the gift of the baby. The baby is used for the source and the fertilized egg is saved. 2. Sperm preservation: objective to save sperm in order to save the key points and save the sperm. The results showed that 18% of the inbred lines and 3% of the samples were combined, and the sperm samples were dissolved at the end of several months. the survival rate of inbred lines was 20% and 45%, respectively. After fertilisation was successful, the new-born babies were forced to ovulate, and the results of artificial insemination were not known. After ovulation, the unfertilized eggs were successfully fertilized in vitro, and the fertilized eggs were successfully fertilized in vitro.