Tissue Factorの生成・発現機構およびVII因子との反応機序

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本年度はTissue factor(TF)の生成・発現の調節機序を明らかにする一環として、ヒト白血病由来細胞株におけるTFm^-RNA及び細胞表面のTF抗原発現性について、分化誘導因子の影響を検討した。ホルボールエステル性分化因子のTPA(10ng/ml)は、分化状態の異なる3種のマクロファージ系細胞株(ML-3、THP-1、RET-1)のいずれに対しても、TFm^-RNA及び細胞表面TF抗原の発現量を2〜4倍増大させた。一方、リンホカイン性分化因子のINF-γ(10^3u/ml)は、いずれの細胞株に対しても、双方の発現量を1/4〜1/10に低下させた。従って、白血病細胞におけるTFm^-RNA及び細胞表面TF抗原の発現性は、TPAによってup-regulationされ、一方、INF-γによってdown-regulationされることが明らかになった。更に、固着性細胞株J-82を用い、細胞表面TFとVII因子間相互作用を解析した。^<125>I-ラベルVII子とJ-82を10mMCa^<2+>共存下incubateすると、J-82細胞表面でのTF-VII因子複合体形成が認められた。この時EDTA添加によって、結合したVII因子は可逆的にJ-82表面上のTFから解離した。興味深いのは、J-82TFに結合したVII因子は、Xa様プロテアーゼによって、限定分解を受け、heavy及びlight鎖に切断されていた。このプロテアーゼは、leupeptin、antitrypsin-IIIに感受性であった。また、細胞表層で生じたTF-VII複合体のエンドサイトシスと引き続く細胞内でのdegradation等は認められなかった。以上の結果より、J-82細胞表面でのTF-VII因子相互作用として、TF-VII複合体形成及びXa様活性化因子による複合体VIIVII因子の活性化によるVIIa因子の生成が示唆された。