ホヤ胚におけるホメオボックス遺伝子の発現制御

海鞘胚胎中同源框基因表达的调控

• 批准号: 63639003
• 负责人: 西駕 秀俊
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: University of Occupational and Environmental Health, Japan
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1988
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1988 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-63639003/
• 关键词: ホメオボックス; 遺伝子; クローニング; 初期発生; モザイク卵; 細胞系譜; ホヤ; 遺伝子発現

本年度は、1.ホヤのホメオボックス遺伝子の単離と、2.ホヤ胚におけるinsituハイブリダイゼーション、イムノスティニング法の検討の2点を計画し、以下の結果を得た。1.サザンブロットの結果に基づいて作成したマボヤのサブゲノムライブラリーより、カイコのホメオボックス(以下Hbx)をプローブとして約2.7kbのDNA断片をクローン化した。このクローンはHbxの45ー60番目のアミノ酸残基に対応する配列を持っていた。45番目のコドンの5'側にはイントロンーエクソン境界のコンセンサス配列が認められ、HbxがDNA結合ドメインの中で分断されていることが示唆された。このDNA断片をプローブとしてマボヤ成体の生殖腺から調製したpolyA^+RNAについてノザンブロットを行なったところ、この遺伝子から約2.8KbのRNAが転写されていることが判明した、そこでCDNAクローニングを行ない、3個のクローンを単離し、内1個について塩基配列を決定しつつある。これまでにHbxがさらに9番目のコドン内で1ケ所、計2ケ所でイントロンにより分断されていること、転写開始点はクローン化したゲノムDNAの5'側、少くとも1.3Kb上流に存在することが判明した。一方マボヤのゲノムDNAのサザンブロット解析によれば単離したHbxと類似したHbxを持つ別の遺伝子の存在は否定的である。2.シロポヤ胚で確立されたinsituハイブリダイゼーション法がマボヤ胚でも同様に働くことをミオシンmRNAをコントロールとして確認した。現在Hbx部分、3'非翻訳領域等をプローブとして、マボヤ生殖腺についてinsituハイブリダイゼーションを試みている。また塩基配列から予想されるアミノ酸配列に基づき合成したペプチドに対し抗体を作成した。現在マボヤ胚についてイムノスティニングを行なう準備をすすめている。次年度では胚での発現パタンを、ノザンブロット、insituハイブリダイゼーションにより明らかにしていく予定である。

This year, the following results have been obtained: 1. the number of entries in the list of entries; 2. the number of entries in the list of entries; 1. The DNA fragment of about 2.7kb was isolated from the base of the DNA fragment. The amino acid residues in Hbx 45 - 60 are aligned. The 5'side of the 45-point terminal is divided into two parts: the terminal and the terminal. The DNA fragment was found to be a polyA^+RNA fragment from adult gonads. The DNA fragment was found to be about 2.8Kb RNA. The DNA fragment was found to be a polyA^+RNA fragment from adult gonads. The DNA fragment was found to be a polyA^+RNA fragment from adult gonads. The DNA fragment was found to be about 2.8Kb RNA fragment from adult gonads. The DNA fragment was found to be a polyA ^+ RNA fragment from adult gonads. The DNA fragment was found to be a polyA ^+ RNA fragment from adult gonads. The DNA fragment from adult gonads was found to be a polyA ^+ RNA fragment from adult gonads. For example, if Hbx is present on the 5'side of the DNA, it is present on the 1.3Kb upstream side. The analysis of DNA fragments shows that Hbx and Hbx are different from each other. 2. The method of determining whether the gene is active or inactive Now Hbx part, 3'non-inverted field, etc., can be used to test the gonads. The base sequence is designed to be synthesized from the base sequence. Now you can get ready for it. In the next year, it is necessary to develop a new concept, a new concept, and a new concept.