权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

受精におけるCキナーゼに関する分子生物学的研究

C-激酶在受精过程中的分子生物学研究

基本信息

批准号：
63640510
负责人：
鈴木秋悦
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-63640510/
关键词：
プロティンキナーゼC 先体反応表層反応精子卵子受精

项目摘要

受精は細胞間連絡および相互作用の一つの興味深いモデルにもかかわらず、その詳細な分子機構は解明されていない。体細胞にみられるシグナル伝達・細胞応答機構は、受精現象においても考えられ、マウスの場合、精子側からみれば卵子透明層糖蛋白質であるZP3がシグナルで先体反応が起こり、卵子側からみればシグナルは精子で、表層顆粒の放出が細胞応答の一つとしてあげられる。受精時における精子・卵子のイノシトールリン脂質、サイクリックヌクレオチド、Caイオン、GTP結合蛋白質そしてCキナーゼというシグナル伝達、細胞応答機構に関与すると考えられる諸因子の研究が活発に行われている。本研究では、特に、Cキナーゼに焦点をしぼり、マウスを用い精子・卵子におけるCキナーゼの役割を分子生物学的見地から分析することにより、哺乳類受精の分子機構を解明している。1.精子におけるCキナーゼ活性とCキナーゼ依存性蛋白質リン酸化:(1)[^3H]PDBu含有培養液にて37℃で培養し、経時的にPDBu^+bindingを測定することにより、腫瘍プロモーターに特異的な受容体が存在することを確認した。(2)細胞質・膜・核画分のPKC活性測定により、細胞質にPCK活性を認め、TPA処理により膜へ移行することが明らかとなった。(3)精子を[^<32>P]orthophosphateにて標識し、Ca^<2+>ioinophore、TPA処理後、二次元電気泳動を行ない、分子量215KDaと35KDa蛋白質リン酸化が、TPA処理により亢進した。(4)ヒト膵臓癌細胞由来の精製PKCを用いたinvitroリン酸化反応の結果、同様に215KDaと35KDa蛋白質リン酸化の亢進を認めた。2.卵子におけるCキナーゼ依存性蛋白質リン酸化:invivoまたはinvitroリン酸化反応の結果、分子量70KDa蛋白質リン酸化が、TPAで亢進した。以上のことより、マウスの受精過程は、PKCを介する蛋白質リン酸反応により調節されている可能性が示唆された。

Fertilization, intercellular communication, interaction, interest, depth, molecular structure, and molecular structure are explained in detail. Somatic cells にみられるシグナル伝达・Cell response mechanism は, fertilization phenomenon においても考えられ, マウスの occasion, sperm side からみれば egg clear layer glycoproteinであるZP3 がシグナルで antenatal reaction がこり、ovum side からみればシグナルは sperm で, surface particles の release が cells 応一つとしてあげられる. During fertilization, the lipids of the sperm and the egg, the lipids of the eggs, the lipids of the sperm and the egg, and the GTP-binding proteinそしてC キナーゼというシグナル伝达, Cell Response Institute に关 and すると考えられる various factors research and activating 発に行われている. This study focuses on sperm and eggs used in this study. Analyze the insights of molecular biology and explain the molecular mechanisms of mammalian fertilization. 1. Sperm sperm activity and sperm acidification-dependent protein acidification: (1) [^3H] PDBu containing culture medium cultured at 37℃ , にPDBu^+binding を measurement at the time of the disease, することにより, tumor プロモーターにThe existence of the specific receptor することをconfirmation した. (2) Measurement of PKC activity in cytoplasm, membrane, and nuclei, determination of cytoplasmic PCK activity, and TPA treatment of membrane and migration. (3) Sperm are labeled with [^<32>P]orthophosphate, Ca^<2+>ioinophore, after TPA treatment, two-dimensional electrophoresis is carried out, molecular weight 215KDa and 35KDa protein are acidified, and TPA treatment is enhanced. (4) The purified PKC of the origin of the cancer cells was confirmed by the acidification and reaction of the invitro acidified protein, and the results of the acidification of the 215KDa and 35KDa proteins were confirmed. 2. Egg におけるC キナーゼ-dependent protein リン acidification: invivo またはinvitro リン acidification and reaction results, molecular weight 70KDa protein リン acidification が, TPA hyperactivity した. The above fertilization process of fertilization, PKC fertilization, protein acid reflux and regulation of PKC are indicative of the possibility.