精子先体反応(特に男性不妊症)におけるカルシウムプロテアーゼの動態

钙蛋白酶在精子顶体反应中的动态（特别是在男性不育中）

• 批准号: 07771393
• 负责人: 尾崎 康彦
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Nagoya City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07771393/
• 关键词: 精子; 先体反応; 男性不妊症; カルシウムプロテアーゼ; カルパイン

健常男性の精子におけるカルパインの存在とその意義を、以下の実験法によって検討した。(1)免疫組織染色法によるカルパインの解析ヒト精子を用いて免疫組織染色法を行ったところ、抗μ-カルパイン抗体による特異的な染色が認められたが、抗m-同抗体には免疫染色されなかった。抗μ-N末端抗体により頭部が免疫染色され、その染色性はA23187処理によって経時・経量的に尾部へ移行する傾向を示」した。また活性型に特異的な抗活性中心抗体により尾部が免疫染色され同処理によって染色性が増強した。(2)SDS-PAGE・ウエスタンブロッテッング法による測定調整した精子を超音波破砕装置を用いた後に遠心処理し、ポリアクリルアミドゲル電気泳動後、ニトロセルロース膜に電気的に転写してエンザイムイムノアッセイを行い、カルパインの抗原性、及び活性化の状態を抗μ-N末端抗体を用いて検索した。同抗体による染色性がA23187処理によって減少し、同処理によって精子内のμ-カルパインが活性化されている事が認められた。(3)精子内カルパイン活性のカゼイン分解能による測定簡易法として、カゼインを基質とした分解活性によりカルパイン活性を測定したところ、カゼイン分解能はA23187処理によって減少し、同処理によってカルパインが活性し自己消化を起こした事が認められた。以上より、ヒト精子にμ-カルパインが存在する事を明らかにした。また、カルパインがヒト精子において細胞内カルシウム濃度の上昇に伴う生殖現象に重要な役割を演じており、新しい精子受精能の指標となりうる可能性が示唆された。現在、精子先体反応、精子受精能及び精子運動率と、各種抗カルパイン抗体染色率、染色部位との相関関係を検討中である。

The significance of the existence of sperm in healthy men is discussed in the following ways (1)Immunohistochemical staining method for sperm analysis Immunohistochemical staining method for sperm analysis Immunohistochemical staining for sperm analysis Immunohistochemical staining for sperm analysis Anti-mu-N-terminal antibodies showed a tendency to shift from head to tail in response to A23187 treatment. Anti-active center antibodies specific to the active type were found to increase the staining activity of the tail. (2)SDS-PAGE method for determination of sperm conditioning, ultrasonic wave disruption device after use of remote processing, sorting, electrophoresis, membrane electrical conditioning, antigenicity, and activation status, anti-N terminal antibody detection. A23187 treatment with the same antibody reduced the activity of sperm cells and reduced the activity of sperm cells with the same treatment. (3)A simple method for determining sperm cell activity and sperm cell decomposition activity is described. The above mentioned sperm is very important. The increase of sperm concentration in the cell is accompanied by the possibility of reproduction, which is an important indicator of sperm fertility. Now, the relationship between sperm precursor reaction, sperm fertilization ability and sperm motility, various anti-sperm antibody staining rates, staining sites, and so on is discussed.