エンドフィリン複合体によるホスファチジン酸代謝のシナプス伝達における役割

内亲素复合物代谢磷脂酸在突触传递中的作用

• 批准号: 15016007
• 负责人: 根本 康夫
• 金额: $ 4.1万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15016007/
• 关键词: シナプス伝達; シナプス小胞; リン脂質; ボスファチジン酸; リソホスファチジン酸

1.エンドフィリン複合体の生化学的・細胞生物学解析先に酵母ツーハイブリッドスクリーニングによって得たcDNA断片をプローブとして、エンドフィリン1-EBP-rho GAP複合体を形成すると思われる新規rho GAPcDNAの全長をラット脳cDNAライブラリーから単離した。ノーザン解析の結果、多くの組織でこのrho GAPの発現が観察された。得られた推定アミノ酸配列を基にしてフュージョンタンパク質および合成ペプチドを作製し、ウサギに免疫してこのrhoGAPタンパク質に対する特異的抗体の作製を行なった。大腸菌発現タンパク質を用いた生化学実験を行った結果、rho GAPドメインはRac1およびCdc42に対してそのGTPase活性を促進する作用があることが示された。また、このrhoGAPタンパク質の全長および各ドメインを培養細胞に発現し、トランスフェリン受容体のクラスリンを介するエンドサイトーシスに及ぼす影響を調べた結果、部分タンパク質の過剰発現がトランスフェリン受容体のクラスリンを介するエンドサイトーシスに対する阻害効果を示すことが観察された。2.エンドフィリン1、2遺伝子欠損マウスの作製マウスゲノムDNAライブラリーをスクリーニングして、エンドライリン1、2遺伝子の翻訳開始コドン部分を持つ第1エキソンを含むゲノムDNA断片を得た。これを基にして、マウスES細胞で相同的組み換えによりエンドフィリン遺伝子の同エキソンをネオマイシン耐性遺伝子で置換するためのターゲッテイングベクターを作製した。エンドフィリン1、2遺伝子欠損マウスの作製のため、ターゲッテイングベクターのES細胞への導入と組み換え体のネオマイシン耐性コロニーの選別を行なった。

1. Biochemistry and cell biology analysis of rho GAP complex. First, yeast cDNA fragments were isolated from yeast. Second, yeast cDNA fragments were isolated from yeast. Third, new rho GAP cDNA fragments were isolated from yeast. The results of the analysis and the development of rho GAP were observed. The preparation of antibodies specific to the putative acid sequence was carried out in the presence of the enzyme and the synthetic enzyme. The results of biochemical experiments on Escherichia coli production and quality control showed that rho GAP Rac1 and Cdc42 promoted the activity of GTase. In addition, the results of adjusting the effects of the length and length of the rhoGAP protein on cell culture, cell culture, and cell culture on cell culture, and the effects of cell culture on cell culture, cell culture, and cell culture on cell culture were observed. 2. The first part of the DNA fragment is obtained by the first part of the DNA fragment. The same group of cells were used to control the growth of the cells. 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 10, 1

项目成果

Sakakibara T, Nemoto Y, Nukiwa T, Takeshima H.: "Identification and characterization of a novel Rho GTPase activating protein implicated in receptor-mediated endocytosis"FEBS Letters. (In press). (2004)

Sakakibara T、Nemoto Y、Nukiwa T、Takeshima H.：“与受体介导的内吞作用有关的新型 Rho GTP 酶激活蛋白的鉴定和表征”FEBS Letters。