プリオン病感染因子の本体と複製分子機構の解明

点击翻译按钮获取中文摘要

プリオン株の分子機構解明に向けて、種々のPrP変異体のPrP^<Sc>への変換効率と、正常型プリオン蛋白(PrP^C)のPrP^<Sc>への変換に及ぼす各変異体の抑制作用(Dominant-negative効果)について、Chandler株あるいは22L株感染N2a58細胞(Ch-N2a58,22L-N2a58)の間で比較検討した。内在性マウスPrPを認識しない3F4抗体のエピトープタグを挿入したMHM2-PrPの発現ベクターを上記細胞に遺伝子導入した。3F4-PrPタグを有する,6種のマウスPrP変異体(Q218K,Q218E,Q97R,Q167R,Q171R,Q185R)も同時に作製し、変異体それ自身のPrP^<Sc>への変換を見る場合は単独で,MHM2-PrPのPrP^<Sc>への変換に対するDominant-negative効果をみる場合はMHM2-PrPと同時に遺伝子導入した。(1)MHM2-PrPはCh- and 22L-N2a58細胞内でPrPScに同等レベルに変換されたが、Q218E,Q218K,Q97R,Q167R,Q171R変異PrPは両株いずれによってもPrP^<Sc>に変換されなかった。一方、Q185Rは22LではPrP^<Sc>に変換されないが,Chandler感染細胞内では変換された。(2)Q218KはCh-N2a58細胞ではMNM2-PrPのPrP^<Sc>変換に対して強いdominant-negative効果を示したが,22L-N2a58細胞ではほとんど効果を示さなかった。一方、Q97R,Q167R,Q171Rは両プリオン株に対して同等のDominant-negative効果を示した。Q185RのPrP^<Sc>への変換効率とQ218KのDominant-negative効果の2つの指標において、Chandlerと22L両株間の顕著な違いが判明した。