プリオン株間干渉によるBSE感染抑制効果

通过朊病毒株之间的干扰抑制疯牛病感染的效果

• 批准号: 18650099
• 负责人: 片峰 茂
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18650099/
• 关键词: プリオン病; プリオン蛋白; 干渉; 海綿状変性

1.目的マウス神経系細胞GT1およびN2a58細胞のマウス順化BSE病原体持続感染系を用いて、他のプリオン株のBSE株に対する干渉現象の有無を検証することを目的とした。2.方法と結果(1)細胞を用いた感染実験に先立ちddY/BSE脳乳剤を用いてエンドポイントアッセイを行い、マウスBSE株の感染価を算出した(LD50/g=10^<8.475>)。(2)ddYマウスの脳乳剤希釈系列を用いて、マウスGT1neo 細胞へのex vivo感染を行った。G418耐性GT(neoGT)を用いた場合、0.001%(10^<3.175>LD50)希釈放を用いても持続感染を検出できた。(3)感染後15継代を経たneoGT/BSEを用いて、FK1株の感染細胞GT/FKと共培養し、FK-1株の感染に対するBSE先行感染の影響を調べた共培養後G418選択培地にて6継代した細胞を用いたウェスタンブロッティングにて、BSE十FK細胞ではFK-1特異的バンドをわずかに認めるが、異常PrP全体量の増加はないことが判明した。BSE株はFukuoka-1感染をSY株と同程度干渉すると思われた。(4)N2a58細胞への感染は、2.0%脳乳剤を用いた場合でも3継代以降、異常PrPは検出し得なかった。P1細胞のクローニング(限界希釈法による)を行ったところ、24クローン中3個、感染細胞を得ることができた。BSE株はスクレーピー株と異なりN2a58への感染効率はかなり低いことが判明した。3.まとめBSEの先行感染がヒト由来のFukuoka-1株感染に対して弱いながらも干渉することが明らかとなった。SY株よるBSE株の干渉については現在検討中である。また他の弧発性CJD株の感染細胞樹立を行っている。BSE株はスクレーピー株とは異なる細胞指向性を有することが示唆された。

1. Purpose マ ウ ス god 経 cell GT1 お よ び N2a58 cells の マ ウ ス hue BSE pathogen in を 続 infection department with い て, he の プ リ オ ン seedlings に の BSE す seaborne る dry involved phenomenon の presence of を 検 card す る こ と を purpose と し た. と 2. The method of results (1) cell を い た infection be 験 に first set ち ddY/BSE 脳 milk tonic を い て エ ン ド ポ イ ン ト ア ッ セ イ を い, マ ウ ス BSE の strains infection 価 を calculate し た (LD50 / g = 10 ^ < > 8.475). (2) ddY マ ウ ス の 脳 milk tonic and 釈 series を い て, マ ウ ス GT1neo cells へ の ex vivo infection を line っ た. G418 patience GT (neoGT) を い た occasions, 0.001% (10 ^ < 3.175 > the LD50) bush 釈 を い for て も hold 続 infection を 検 out で き た. (3) infection after 15 継 generation を 経 た neoGT/BSE を い て, FK1 の infected cells GT/FK1 - FK と trained し, infection of FK1 - FK - 1 strains の に す seaborne る BSE first infection の influence を adjustable べ た trained after G418 sentaku petty に て 6 継 generation し た cells を using い た ウ ェ ス タ ン ブ ロ ッ テ ィ ン グ に て, BSE ten FK1 - FK is fine The specific バ <e:1> ドをわず ドをわず に に of the cell で <e:1> FK-1 recognizes めるが, and the abnormal total amount of PrP <s:1> increase とが な とが とが determines た. The BSE strain と Fukuoka-1 infects the をSY strain と and is equally involved in すると thought われた. Cells (4) N2a58 へ は の infection, 2.0% 脳 milk tonic を with い た occasions で も 継 generation 3 onwards, abnormal PrP は 検 out し must な か っ た. P1 cells の ク ロ ー ニ ン グ method (limit when 釈 に よ る) line を っ た と こ ろ, 24 ク ロ ー ン in 3, infected cells を る こ と が で き た. BSE strains は ス ク レ ー ピ ー と different strains な り N2a58 へ の infection rate of unseen は か な り low い こ と が.at し た. 3. ま と め BSE の first infection が ヒ ト origin の Fukuoka - 1 strain of に し seaborne て weak い な が ら も dry involved す る こ と が Ming ら か と な っ た. The SY strain よる, the BSE strain <s:1> gan shi に, に て, て, and are currently in 検 discussion である. Youdaoplaceholder0 His <s:1> arched CJD strain <s:1> infected cells establish を rows って る る. BSE strains は ス ク レ ー ピ ー strains と は different な る cells directionality を す る こ と が in stopping さ れ た.

项目成果

Prion strain-dependent differences in conversion of mutant prion proteins in cell culture

• DOI: 10.1128/jvi.00424-06
• 发表时间: 2006-08-01
• 期刊: JOURNAL OF VIROLOGY
• 影响因子: 5.4
• 作者: Atarashi, Ryuichiro;Sim, Valerie L.;Katamine, Shigeru
• 通讯作者: Katamine, Shigeru

Newly established in vitro system with fluorescent proteins shows that abnormal expression of downstream prion protein-like protein in mice is probably due to functional disconnection between splicing and 3' formation of prion protein pre-mRNA.

新建立的荧光蛋白体外系统表明，小鼠下游类朊病毒蛋白的异常表达可能是由于朊病毒蛋白前体mRNA的剪接和3形成之间的功能性脱节所致。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Gene 386 (1-2)
• 作者: 小針大助;瀬尾哲也;Yoshikawa D et al.
• 通讯作者: Yoshikawa D et al.

Immunization with recombinant bovine but not mouse prion protein delays the onset of disease in mice inoculated with a mouse-adapted prion

• DOI: 10.1016/j.vaccine.2006.09.078
• 发表时间: 2007-01-22
• 期刊: VACCINE
• 影响因子: 5.5
• 作者: Ishibashi, Daisuke;Yamanaka, Hitoki;Sakaguchi, Suehiro
• 通讯作者: Sakaguchi, Suehiro

Immunohistochemical characterization of cell types expressing the cellular prion protein in the small intestine of cattle and mice.

牛和小鼠小肠中表达细胞朊病毒蛋白的细胞类型的免疫组织化学特征。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Histochem Cell Biol 127(3)
• 作者: Yoichi;Honda;Junko;Watari;Naofumi;Sakatoku;Takahito;Watanabe;Takashi;Watanabe;Y.Arima;Miyazawa K et al.
• 通讯作者: Miyazawa K et al.

プリオン仮説(タンパク質単独犯説)は本当か。

朊病毒假说（仅由蛋白质负责）是真的吗？

• 发表时间: 2006
• 期刊: 科学(岩波書店) 11月号
• 作者: J.Arai;M.Takahashi;K.Natsume;M.A.Suico;Y.Matsui;片峰 茂
• 通讯作者: 片峰 茂