パラミクソウイルスの出芽に関わるシグナルと宿主因子の解明

副粘病毒出芽涉及的信号和宿主因子的阐明

• 批准号: 15019067
• 负责人: 坂口 剛正
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15019067/
• 关键词: ウイルス; 粒子形成; 出芽; ウイルス様粒子; 宿主因子

パラミクソウイルス科センダイウイルスの出芽に必要なウイルス蛋白質配列を同定し、さらに関連する宿主因子を探索することを本研究の目的とする。(1)センダイウイルスのウイルス様粒子(VLP)産生系の確立と各ウイルス蛋白質の出芽に対する作用センダイウイルスの構造蛋白質を発現するプラスミドを293T細胞に導入し、培養上清をショ糖密度平衡遠心で分画して、放出されたウイルス様粒子の蛋白質を定量した。同時に、細胞に残った蛋白質を定量して、出芽の効率を検討した。M・N・F・HNを同時に発現するとウイルスと同等の密度・形態をもつVLPができた。この研究の過程で、各ウイルス蛋白質の役割、および各蛋白質間の相互作用を明らかにすることが出来た。さらに、以前から出芽への関連が示唆されていた非構造蛋白質であるC蛋白質を同時に発現するとVLPの出芽効率が3倍程度に上昇した。(以上、投稿中)(2)センダイウイルス出芽に関与する宿主因子の探索上記で確立したウイルス様粒子産生系を用いて、出芽に関連することが予想される宿主蛋白質について検討した。Vps4のドミナントネガティブ変異体でセンダイウイルスの出芽が阻害された。このことから、小胞体ベシクル輸送に関連するESCRT複合体が出芽に働いている可能性がある。一方、ESCRT複合体を出芽の場にリクルートするTsg101、Nedd4といったユビキチン関連蛋白質が出芽に関与するという結果は得られなかった。この働きをする蛋白質の探索が必要である。以上のように、パラミクソウイルスの出芽についてVLP産生系を確立し、関連する宿主因子の解析を行った。今後は、このVLP産生系を使用して、出芽に中心的な役割を果たすM蛋白質の出芽に必要な領域を決定し、関連する宿主因子を明らかにする予定である。

The purpose of this study is to explore the identity and association of host factors in the protein sequence of the protein. (1)The plasmid for the establishment of a VLP production system and the development of VLP structural proteins that function in the budding of each VLP protein were introduced into 293T cells, the culture supernatant was separated telecentrically based on sugar density balance, and the proteins of the released VLP particles were quantified. At the same time, the quantitative analysis of residual protein and the efficiency of germination were discussed. M·N·F·HN·M·N·F·H·H·H The process of this study is to clarify the interaction between proteins and the separation of proteins. In the past, the germination rate of VLP increased by 3 times. (Above, in submission)(2) The exploration of host factors related to germination in Kenya has established that the use of such particle-producing systems is related to germination. This is an unexpected exploration of host proteins. Vps4's design and production process is different from the original design and production process. The possibility that the ESCRT complex may be involved in cell transport is discussed. A side, ESCRT complex budding field, Tsg101, Nedd 4, related protein, budding field, Nedd4, related protein, Nedd4, Nedd 5, Nedd 6, Nedd 7, Nedd 6, Nedd 6, Nedd 7, Nedd 6, Nedd 7, Nedd 6, Nedd 6, Nedd 7, Nedd 6, Nedd 6, Nedd It is necessary to explore the protein in this field. The VLP production system is established and the host factors are analyzed. In the future, VLP production is determined by the presence of a host factor in the budding center.

项目成果

Sakaguchi, T.: "Masking of the contribution of V protein to Sendai virus pathogenesis in an infection model with a highly virulent field isolate"Virology. 313(2). 581-587 (2003)

Sakaguchi, T.：“在高毒力野外分离株的感染模型中掩盖 V 蛋白对仙台病毒发病机制的贡献”病毒学。

Kato, A.: "Characterization of the amino acid residues of Sendai virus C protein that are critically involved in its interferon antagonism and RNA synthesis down-regulation"Journal of Virology. 78(In press). (2004)

Kato, A.：“仙台病毒 C 蛋白氨基酸残基的表征，这些残基与其干扰素拮抗作用和 RNA 合成下调密切相关”，《病毒学杂志》。

Okimoto, T.: "Safety and growth suppressive effect of intra-hepatic arterial injection of AdCMV-p53 combined with CDDP to rat liver metastatic tumors"J.Exp.Clin.Cancer Res.. 22(3). 399-406 (2003)

Okimoto, T.：“肝动脉内注射AdCMV-p53联合CDDP对大鼠肝转移瘤的安全性和生长抑制作用”J.Exp.Clin.Cancer Res..22(3)。