損傷乗り越え複製においてDNA複製エラーを起こすRev1の機能解析と発がん

Rev1 的功能分析（在损伤克服复制过程中会导致 DNA 复制错误）和致癌作用

• 批准号: 15023240
• 负责人: 神谷 研二
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15023240/
• 关键词: REV1; 損傷乗り越えDNA複製; DNAポリメラーゼYファミリー; がん; 発がん高感受性; 点突然変異; 遺伝的不安定性; Rev7

ヒトREV1は,損傷乗り越え型DNAポリメラーゼYファミリーの一つで,鋳型塩基に対してdCMPを取り込むdCMP transferase活性を持つ。Yファミリーに属するXPVが色素性乾皮症の原因遺伝子として同定されたことから,損傷乗り越えDNA合成の機能変化と発癌との関連が注目されている。REV1遺伝子は,error-proneのDNA修復に関与し,突然変異の誘発に重要な役割を担っている。我々は,損傷乗り越えDNA合成に関与するREV1遺伝子の機能と発癌との関連を調べるために,REV1の生化学的解析を行った。その結果,ヒトREV1タンパク質のdCMP転移活性は,鋳型Gと脱塩基部位に対して効率が高いことから,REV1が脱塩基部位の損傷乗り越えDNA合成に重要な役割を担い,点突然変異を誘発する可能性が高いことが示唆された。この事から,REV1の機能亢進は,点突然変異を生成し易い遺伝的不安性を誘導し,発がんに関与する可能性が考えられた。一方,Rev1が相互作用する蛋白質を解析した結果,Rev7とPolκがRev1のC末端100アミノ酸残基に競合的に結合する事を生化学的に証明した。さらに,Polη,Polτも同じくRev1のC末端に結合することを見いだし,Rev1が他の損傷乗り越えDNAポリメラーゼと複合体を形成する一端を明らかにした。さらに,放射線や化学発がん剤に高感度なマウスを開発する為に,mRev1を過剰発現したトランスジェニック(Tg)マウスの作成を行った。遺伝子発現の制御が可能なメタロチオネインプロモーターの下流にmRev1遺伝子を組み込んだMT-1プラスミドを構築し,Tgマウスの作成を行った。その結果,現在までに7系の独立したRev1トランスジェニックマウスを得た。これらマウスの各臓器よりmRNAを取り出し,mRev1トランスジーンの発現をRT-PCR法で検討した。各臓器でmRev1トランスジーンが発現していることを確認した。

REV1 is a type of DNA transfer enzyme that is involved in DNA damage, and dCMP transfer activity is involved in DNA damage. XPV is the cause of xeroderma pigmentosum, and the relationship between functional changes in DNA synthesis and cancer development is noted. REV1 gene mutation,error-prone DNA repair related to, sudden change induced by important service. We are interested in the regulation of REV1 gene function and cancer development in relation to DNA synthesis, and in the biochemical analysis of REV1. As a result, the dCMP migration activity of REV1 was higher than that of REV 1 in the absence of DNA, and the damage of REV1 in the absence of DNA was more important in DNA synthesis, and the mutation of REV1 was more likely to occur. The possibility of REV1 hyperfunction, sudden change of point, generation of change, and disturbance induced by change of point is examined. On the other hand,Rev1 interaction protein analysis results,Rev7 and Polκ 1 C terminal 100 amino acid residues in the binding of biochemical evidence Polη, Pol τ and Rev1 C-terminal binding,Rev1 and other damage to DNA complex formation, one end of the clear In the meantime, the production of radioactive and chemical compounds with high sensitivity is under way, and mRev1 is under way. The development of the gene is possible in the downstream of mRev1 gene. The gene is composed of MT-1 gene and Tg gene. As a result, 7 systems are now independent of Rev1. The mRNA expression of these genes was detected by RT-PCR. Each of the devices was identified as a single device.

项目成果

Masuda, Y.: "Structure and enzymatic properties of a stable complex of the human REV1 and REV7 proteins"J.Biol.Chem.. 278・14. 12356-12360 (2003)

Masuda, Y.：“人 REV1 和 REV7 蛋白的稳定复合物的结构和酶特性”J.Biol.Chem.. 278・14 (2003)。

Guo.C.: "Mouse Rev1 protein interacts with multiple DNA polymerases involved in translesion DNA synthesis"EMBO J.. 22・24. 6621-6630 (2003)

郭成：“小鼠Rev1蛋白与跨损伤DNA合成中涉及的多种DNA聚合酶相互作用”EMBO J.. 22・24（2003）。