乳腺の脂肪前駆細胞が分泌する乳腺増殖因子の分離・精製

乳腺前脂肪细胞分泌的乳腺生长因子的分离纯化

• 批准号: 04670210
• 负责人: 神谷 研二
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04670210/
• 关键词: 乳腺間充織細胞; 脂肪前駆細胞; 増殖因子; 乳腺上皮細胞

ラット乳腺より樹立した乳腺間充織細胞の生物学的特性を決定することは、乳腺細胞との相互作用を解析する上でも重要である。そこで先ず、樹立細胞の生物学的特性を解析した。樹立細胞は1‐メチル‐3‐イソブチルキサンチン処理により脂肪滴の蓄積が認められることから、脂肪前駆細胞であることが確認された。乳腺でのestrogenの乳腺細胞に対する増殖活性は、estrogenが間充織細胞に作用し、この細胞から増殖因子の分泌を誘導することによると推定されている。樹立細胞をestrogen処理し、培養上清中の乳腺細胞に対する増殖活性を検討したが、estrogen処理による変化は認められなかった。estrogenの作用機構については今後の検討が必要である。次に、この増殖活性の細胞に対する特異性を検討する目的で、間葉系細胞である3Y1、rat1、NIH/3T3およびBalb/3T3と、ラット乳腺上皮細胞を用いて、これら細胞に対する増殖活性を検討した。その結果、3Y1、rat1およびNIH/3T3に対する増殖活性はほとんど認められず、Balb/3T3の細胞数を対照群の約2倍に増加させる活性を認めるに止まった。これに対し、乳腺上皮細胞では対照群の約15倍の細胞増加を認め、樹立脂肪前駆細胞より分泌される増殖因子は、乳腺上皮細胞に特異的な増殖活性を有することが明かとなった。増殖因子の分離は、現在2つの方法で進行中である。培養上清から増殖因子を精製する方法では、精製をより容易にする目的で培養系の無血清化を試みた。しかし、現在までのところ成功していない。分子生物学的手法により、増殖因子のcDNAを直接分離する方法では、clone化した脂肪前駆細胞より増殖因子を分泌していない細胞株の分離を行っている。同一の細胞株より増殖因子分泌細胞と非分泌細胞が得られれば、両者のcDNAライブラリーのsubtraction法により目的のcDNAが得られるものと考えられる。

The biological characteristics of mammary gland mesenchymal cells are important for the analysis of mammary gland cell interactions. Analysis of biological characteristics of established cells. 1-cell-3-cell- The proliferation activity of mammary gland estrogens in mammary gland cells is related to the role of estrogens in mesenchymal cells and the induction of proliferation factors in mammary gland cells. The proliferation activity of mammary gland cells in culture supernatant was investigated. Estrogen's action mechanism is necessary for future investigation. In addition, cell specific assays for this activity were conducted on mesenchymal cells such as 3Y1, RAT1, NIH/3T3 and Balb/3T3. Results: 3Y1, rat1 and NIH/3T3 cell populations showed approximately 2-fold increase in reproductive activity. In contrast, breast epithelial cells have a 15-fold increase in cell proliferation and secretion of growth factors before fat is established, and breast epithelial cell-specific growth activity is also observed. The separation of reproductive factors is now in progress. The method for purification of culture supernatant and growth factor is simple and easy. The serum-free culture system is tested. Now we're going to be successful. Molecular biology methods for direct isolation of cDNA for growth factors include cloning and cloning of adipocytes and isolation of cell lines secreting growth factors. The same cell line, growth factor-secreting cells, and non-secreting cells were obtained by cDNA subtraction.

项目成果

Niwa,O.,Enoki,Y., Sadamoto,S.,Kamiya, K.,Yokoro,K.: "Random process of metastsis and generation of heterogeneity in a mouse sarcoma line." Japanese Journal of Cencer Research. 84. 42-47 (1993)

Niwa,O.、Enoki,Y.、Sadamoto,S.、Kamiya, K.、Yokoro,K.：“小鼠肉瘤系中转移的随机过程和异质性的产生。”

神谷 研二、横路 謙次郎: "発癌 -理論と実際-" 学会出版センター, 326 (1992)

Kenji Kamiya、Kenjiro Yokoji：《癌发生 - 理论与实践》学会出版中心，326（1992）