权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

4'-thioRNAによるRNA干渉の基礎研究とがん遺伝子治療への展開

4-thioRNA RNA干扰基础研究及其在癌症基因治疗中的应用

基本信息

批准号：
15025203
负责人：
南川典昭
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15025203/
关键词：
RNA干渉核酸医薬 siRNA RNA 4'-thioRNA ルシフェラーゼ

项目摘要

本研究では,RNA干渉(RNAi)をがん遺伝子治療法として開発するための基礎研究として4-thioRNAによるRNAi効果を系統的に検討し,modification-activity相関を明らかにしin vivoでの使用可能な修飾siRNAの開発を目差す.平成15年度の研究において申請者はまず,様々な修飾に対応できる4'-チオリボヌクレオシドユニットの合成を完了した.続いて得られたヌクレオシドユニットを用いてpGL2ルシフェラーゼ遺伝子をターゲットとした各種修飾RNA (4'-thioRNA)を化学的に合成し,modification-activity相関を検討した.ウリジンユニットの修飾(19残基中5残基)ではセンス,アンチセンスさらに両鎖の修飾に対して許容であった.それに対してシチジンユニットの修飾(19残基中5残基)では修飾数が同じであるにも関わらず,両鎖の修飾においてRNAi効果が全く観察されなかった.これにより修飾体の導入部位もRNAi効果に極めて重要であることが明らかになった.さらに修飾数を増やしてゆくと(19残基中10残基および全修飾)効果は減少し,特にアンチセンス鎖の修飾でその現象は顕著に観察された.siRNAによるRNAi効果の発現には5'末端のリン酸化にはじまりヘリケースによる2本鎖の解離,続くRISC形成など非常に複雑な経路を必要とする.そこで検討したsiRNA数種について5'末端をリン酸化したものについてもRNAi効果を評価した.その結果,RNAi効果の増強,回復は見られず5'末端のリン酸化が重要なステップではないことが示された.続いてヘリケースによる2本鎖の解離の重要性を考察する目的で2本鎖RNAの熱的安定性を測定した.その結果,修飾数に比例して2本鎖RNAは熱的に安定になることが明らかとなり,RNAi効果の減少の原因の一つとして2本鎖RNAの熱的安定性が関わっていることが示された.これについては現在,ミスマッチ配列を導入することにより,より詳細な考察を行うための実験を行っている.現在,核酸医薬品として臨床使用されているものにアンチセンス核酸がある.この核酸分子ではgapmerと呼ばれる修飾法が一般に用いられている.そこでsiRNA分子についてもその修飾法を検討した.すなわち3'末端および5'末端6残基を修飾体とし,切断部位と予想される中央7残基を天然型とした各種siRNAを合成した.これらについても現在,RNAi効果ならびに効果の持続性の両面について検討中である.

This study aims to explore the basic research and development of RNAi gene therapy, and the systematic investigation and modification-activity correlation between RNA gene therapy and RNA gene therapy in vivo. In the study of Heisei 15, the applicant was able to complete the synthesis of the 4'-color conversion and modification of the product. In addition, we also discussed the chemical synthesis and modification-activity correlation of modified RNA (4'-thioRNA). The modification (5 residues out of 19) of the amino acid residues in the amino acid residues of the amino acid residues. The number of modifications (5 residues out of 19) was the same as that of the RNAi gene. The introduction site of the modifier is extremely important for RNAi. The number of RNAi modifications increased (10 out of 19 residues were fully modified), resulting in a decrease in RNAi activity, especially in the presence of RNAi modifications. The discovery of RNAi activity in siRNA was observed in the presence of 5'-terminal RNAi activity, which was necessary for the formation of a very complex RISC pathway. Several siRNA species were identified and their RNAi effects were evaluated. As a result,RNAi effects were enhanced, and recovery was observed at the 5'end of RNAi. To investigate the importance of the dissociation of 2-localRNA, the thermal stability of 2-localRNA was determined. As a result, the number of modifications is proportional to 2. The thermal stability of the RNA is related to the thermal stability of the RNA. This is the first time I've ever seen a woman who's been in a relationship with someone else. At present, nucleic acid medicine and clinical use of nucleic acid. This nucleic acid molecule is a gapmer. A modified approach to siRNA detection is proposed. The 3'-terminal and 5'-terminal siRNAs were modified and the central 7 residues were synthesized. The RNAi effect is persistent and persistent.