TRAIL耐性分子メカニズムの解析と臨床応用

TRAIL耐药的分子机制分析及临床应用

• 批准号: 15025264
• 负责人: 佐々木 勝則
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15025264/
• 关键词: アポトーシス; TRAIL; 耐性; リボザイム; ライブラリー; Epstein Barr Virus; 大腸がん細胞株

アポトーシス誘導作用を示すTRAILは、がん治療への応用が期待される。一方でTRAIL受容体を発現しながらもTRAIL耐性を示すがん細胞の存在も報告されており、アポトーシス耐性獲得の機序を解析することは、TRAIL耐性を克服する有効ながんの治療法開発へと結びつくものである。本研究では、リボザイム・ライブラリーを用いたスクリーニングによりTRAILシグナル伝達において「関所」となる候補遺伝子を同定し、これら蛋白質の分子機能を解析し、TRAILの細胞内シグナルにおいてどのような位置付けにあるのかを解析する。ハンマーヘッド型リボザイム・ライブラリーの高発現系として、エピゾーマルに増幅可能なEpstein Barr Virus遺伝子の一部を含む哺乳類動物発現ベクターを作製した。大腸がん細胞株DLD-1にリボザイム・ライブラリーを発現させた後TRAIL刺激を行い耐性獲得細胞を作製した。この細胞内のリボザイム発現ベクターをHart法にて回収し750種のリボザイムを解析した。その結果、TRAIL耐性細胞として、細胞核に存在するステロイド・レセプターRXRβ蛋白やcytoskeletal関連蛋白、DAP Kinase 1蛋白が欠失したフェノタイプ細胞の存在が確認された。さらに2種類の異なるリボザイムが同一のmRNAを標的としたなかに機能未知遺伝子19種類を同定した。Calreticulinに結合しC末端にKinase domainを持つ45kDaの蛋白質、30kDaのPAP2類似リン酸化蛋白質、類似蛋白質が存在せず分類できない蛋白質(25kDa)の3種類のcDNAをそれぞれ過剰発現させることでアポトーシスを誘導することができ、これら蛋白質がTRAIL誘導アポトーシスに関与している可能性が示唆された。

The inducing effect of アポトーシスをshows すTRAILは, and the がんtreatment is expected to be used. One party's TRAIL receptors are now showing the existence of TRAIL-resistant cells and reporting on them. Resistance acquisition machine sequence を analysis することは, TRAIL resistance を overcome する effective ながんの treatment method 开発へと knot びつくものである. In this study, the use of いたスクリーニングによりTRAILシグナル伝达において『Sekisho』となる candidate supplement伝子を同定し, これらproteinのmolecule functionをanalyticし, TRAILのcellular シグナルにおいてどのような Position pay けにあるのかをanalytic する.ハンマーヘッド type リボザイム・ライブラリーの高発existing series として、エピゾーマルにEnlargement possibleなEpstein Barr Virus's last chapter contains the mammals that are now produced by the company. The large intestinal cell line DLD-1 was produced using a TRAIL-stimulated cell line that is resistant to TRAIL stimulation.こののリボザイム発appears ベクターをHart method にて recoveryし750 kinds of のリボザイムをanalysisした.その results, TRAIL-resistant cells として, nucleus に presence するステロイド・レセプターRXRβ protein やcytoskeletal associated protein, DAP Kinase 1. Confirmation of the loss of protein and the existence of cells. There are 2 types of さらにのdifferent なるリボザイムがthe same のmRNA をtarget としたなかにThe function is unknown and 19 types of としたなかた are the same. Calreticulin binds to the C-terminus of Kinase 45kDa protein of domain holder, 30kDa PAP2-like lyanolylated protein, 3 types of protein similar to 25kDa protein (25kDa) are classified.させることでアポトーシスをinducing することができ, これらprotein がTRAIL induces アポトーシスに关 and しているpossibility がshows instigation された.

项目成果

Huang, J.: "Bcl-xL gene transfer protects the heart against ischemia / reperfusion injury."Biochemical and Biophyscal Research Communications. 311. 64-70 (2003)

Huang, J.：“Bcl-xL 基因转移可保护心脏免受缺血/再灌注损伤。”生物化学和生物物理学研究通讯。

Hagiwara, S.: "Inhibition of typr 1 procollagen production by tRNA^<val> CTE-HSP47 ribozyme."The Journal of Gene Medicine. 5. 784-794 (2003)

Hagiwara, S.：“tRNA^<val> CTE-HSP47 核酶抑制typr 1 前胶原产生。”基因医学杂志。

Kurozumi, K.: "BDNF gene-modified mesenchymal stem cells promote functional recovery and reduce infarct size in the rat middle cerebral artery occlusion model."Molecular Therapy. 9. 189-197 (2004)

Kurozumi, K.：“BDNF 基因修饰的间充质干细胞促进大鼠大脑中动脉闭塞模型的功能恢复并减少梗塞面积。”分子治疗。

Kobune, M.: "Telomerized human multipotent mesenchymal cells can differentiate into hematopoietic and cobblestone area-supporting cells."Experimental Hematology. 31. 715-722 (2003)

Kobune, M.：“端粒化的人类多能间充质细胞可以分化为造血细胞和鹅卵石区域支持细胞。”实验血液学。

Yamauchi, A.: "Pre-administration of angiopoietin-1 followed by VEGF induces functional and mature vascular formation in a rabbit ischemic model."The Journal of Gene Medicine. 5. 994-1004 (2003)

Yamauchi, A.：“先给予血管生成素-1，然后再给予 VEGF，可在兔缺血模型中诱导功能性和成熟的血管形成。”《基因医学杂志》。