クロストリジウムヒストリチクム菌由来コラゲナーゼの瘢痕治療への応用

溶组织梭菌胶原酶在疤痕治疗中的应用

• 批准号: 17K17029
• 负责人: 松永 洋明
• 金额: $ 1.83万
• 依托单位: University of Occupational and Environmental Health, Japan (2018)Kyorin University (2017)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2017
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2017-04-01 至 2019-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17K17029/
• 关键词: クロストリジウムヒストリチクム菌; ケロイド; 肥厚性瘢痕; 瘢痕拘縮; クロストリジウムヒストリチクム菌由来コラゲナーゼ

マウスの皮下にヒト瘢痕組織を埋入する動物瘢痕モデルを作成することを目標とした。瘢痕組織へクロストリジウムヒストリチクム菌由来コラゲナーゼを注入し て瘢痕への治療的効果を評価した。評価方法は組織重量、組織学的評価、コラーゲン定量を行なった。 1)ヒト瘢痕組織埋入マウスモデルの作成とコラゲナーゼ注入:ヒト肥厚性瘢痕組織またはケロイド瘢痕組織を、直径5mm、厚さ3mmの円盤状に切り出し、ヌード マウス背部に、正中切開から両側背部の皮下組織に埋入した。2週間後、国内で製造販売承認が得られているクロストリジウムヒストリチクム菌由来コラゲナー ゼ(ザイヤフレックス:旭化成ファーマ株式会社)を、マウス皮下に移植した瘢痕組織に直接注入した。対側にはコントロールとしてコラゲナーゼと同量の生食 を注入した。さらに4週間後、移植組織と直上のマウス皮膚を切除し、組織重量および組織学的評価とタンパク量の評価を行なった。 2)組織学的評価:切除した組織をパラフィンに包埋して薄切し、ヘマトキシリン・エオジン染色で形態・構造を観察した。また、コラーゲンを染色してコラー ゲン繊維の配列を観察し、CD31免疫染色で血管のサイズと数を定量的に評価した。 3)タンパク量の評価:採取した組織をホモジナイズし、コラーゲン定量キットを用いてヒドロキシプロリン量を定量した。また、ホモジナイズ後にウェスタン ブロット解析を行い、1・3・4型コラーゲン抗体を用いて定量的に発現を評価した。

The subcutaneous scar tissue is embedded in the scar tissue of the animal and is made into target scar tissue. The origin of scar tissue injection is the injection of scar tissue. The effect of scar tissue treatment is evaluated. The evaluation method includes tissue weight, histological evaluation, and quantitative analysis. 1) ヒウスモデルの成とコラゲナーゼInjection: ヒトHypertrophic Scar Group Weaving scar tissue, diameter 5mm, thickness 3mm, disk-shaped cutter, cut out The subcutaneous tissue of the side back is buried after the midline incision is made. After 2 weeks, the domestic manufacturer and seller recognized the origin of the bacteriaゼ(ザイヤフレッス: Asahi Kasei Chemical Co., Ltd.) を, マウス subcutaneous transplantation and direct injection of scar tissue. The same amount of raw food as the raw food of the same amount. After 4 weeks, the transplanted tissue was removed directly from the skin and the weight of the tissue was evaluated by histology. 2) Histological evaluation: The tissue was excised, the tissue was embedded, the tissue was thinly sectioned, and the tissue was stained and the morphology and structure were examined.また, コラーゲンを staining してコラー ゲン繊dimensional のalignment を観看し, CD31 immunostaining vascular のサイズと number をquantitative evaluation 価した. 3) タンパクquantityの価: Take the したorganization をホモジナイズし, コラーゲンquantitativeキットを Use いてヒドロキシプロリンquantityをquantitativeした.また、ホモジナイズ后にウェスタンThe ブロット analysis of を行い, 1, 3, 4 types of コラーゲン antibodies を いて quantification of に発appears を価した.