O^6-アルキルグアニン-アルキル転移酵素の制がんと発がんにおける役割

O^6-烷基鸟嘌呤烷基转移酶在癌症控制和癌发生中的作用

• 批准号: 04151034
• 负责人: 池永 満生
• 金额: $ 11.2万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 1992
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04151034/
• 关键词: DNA修復酵素; O^6-アルキルグアニン; アルキル転移酵素(MGMT); ヒトMGMT遺伝子; Mer^-細胞; 抗ヒトMGMT抗体; 選択的化学療法; アルキル塩基高感度検出法

平成4年度の主要な研究成果は以下の通りである。1.多くの培養ヒト腫瘍細胞株についてO^6-アルキルグアニン-アルキル転移酵素(MGMT)の活性を測定し、約20%の株が酵素活性欠損のMer^-細胞株であることを確認した(本年度に購入した炭酸ガス培養器を用いて、多数の細胞を培養することができた)。また、74例の種々の臓器の腫瘍組織のMGMT活性を測定し、そのうち6例がMGMT活性を欠損しているMer^-型の腫瘍であることを見出した。2.MGMT遺伝子の発現制御機構を明らかにするために、ヒトMGMT遺伝子のプロモーター領域をクローニングした。CATアッセイ法によって遺伝子の発現を調べたところ、正常ヒト由来のプロモーター領域は、Mer^-細胞でもMGMT活性を有するMer^+細胞でも同でように発現した。また、Nuclear run on法によってMGMT遺伝子の転写状況を解析すると、Mer^-細胞でもMer^+細胞と同じレベルの転写開始が認められた。このことから、Mer^-細胞ではmRNAの伸長かプロセッシングに異常があるものと考えられる。3.大腸菌で大量に発現させたヒトMGMTを用いて、これに対するポリクローナル抗体を作製した。ウエスタンブロットによる解析から、この抗体はヒトMGMTを特異的に認識することを確認した。今後は、これを用いて組織レベルでMer^-腫瘍を検出することを試みる。4.移植脳腫瘍の系において、O^6-ベンジルグアニンの前投与によってMGMTを不活性化することでACNUに高感受性になることが明らかとなり、抗腫瘍効果の増強剤としての有効性が示唆された。5.我々が開発したアルキル化塩基の高感度検出法(PREPI法)によって、ヒト組織のDNAにおいて1億個の塩基中の1個のO^6-アルキルグアニンでも検出できることを明らかにした。

The main research results of Heisei 4 are as follows: 1. The activity of MGMT was measured in many cultured tumor cell lines, and about 20% of the Mer cell lines with deficient enzyme activity were confirmed (carbon acid incubators were purchased this year and most of the cells were cultured). MGMT activity was measured in 74 cases of tumor tissue and 6 cases of tumor tissue with MGMT activity deficient. 2. The development control mechanism of MGMT gene is clearly defined. The expression of MGMT in Mer^+ cells is regulated by CAT gene expression, and the expression of MGMT in Mer^+ cells is regulated by CAT gene expression. MGMT gene status analysis, Mer ^-cell, Mer^+ cell, Mer^-cell, Mer^-cell, Mer^- The expression of mRNA in the cell is very different from that in the cell. 3. Coliform bacteria are produced in large quantities and MGMT is used to control the production of antibodies. The antibody was identified as MGMT specific. In the future, we'll try to organize a meeting. 4. Transplantation of tumor cells in the early stage and inactivation of MGMT, high susceptibility of ACNU, enhancement of tumor resistance, and effective response 5. The highly sensitive detection method (PREPI method) for the detection of DNA fragments in human tissues contains one of the 100 million DNA fragments.

项目成果

Kanji Ishizaki: "Infrequent mutation of the <ras>___- genes in skin tumors of Japanese xeroderma pigmentosum patients" International Journal of Cancer. 50. 382-385 (1992)

Kanji Ishizaki：“日本色素性干皮病患者皮肤肿瘤中 <ras>___- 基因的罕见突变”《国际癌症杂志》。

Yi Wang: "Correlation between DNA methlylation and expression of O^6-methylguanine-DNA methyltransferase gene in cultured human tumor cells" Mutation Research. 273. 221-230 (1992)

王毅：“培养人肿瘤细胞中DNA甲基化与O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因表达的相关性”突变研究。

Masao Fukuhara: "Induced synthesis of O^6-methylguanine-DNA methyltransferase in rat hepatoma cells exposed to damaging agents" Japanese Journal of Cancer Research. 83. 72-77 (1992)

Masao Fukuhara：“在暴露于损伤剂的大鼠肝癌细胞中诱导 O^6-甲基鸟嘌呤-DNA 甲基转移酶的合成”，《日本癌症研究杂志》。

Akiko Shiraishi: "Isolation and characterization of cDNA and genomic sequences for mouse O^6-methylguanine-DNA methyltransferase" Carcinogenesis. 13. 289-296 (1992)

Akiko Shiraishi：“小鼠 O^6-甲基鸟嘌呤-DNA 甲基转移酶的 cDNA 和基因组序列的分离和表征”致癌作用。

Jian-min Chen: "O^6-Methylguanine-DNA methyltransferase activity in human tumors" Carcinogenesis. 13. 1503-1507 (1992)

陈建民：“人类肿瘤中的 O^6-甲基鸟嘌呤-DNA 甲基转移酶活性”致癌作用。