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哺乳類O^6-アルキルグアニン修復酵素遺伝子のクローニング

哺乳动物O^6-烷基鸟嘌呤修复酶基因的克隆

基本信息

批准号：
63015012
负责人：
許南浩
金额：
$ 1.47万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-63015012/
关键词：
DNA修復発がん DNA附加体アルキル化 O^6-アルキルグアニン

项目摘要

N-ニトロン化合物の発癌過程におけるO^6-アルキルグアニンの重要性に鑑み,われわれは哺乳類O^6-アルキルグアニン修復酵素のクローニングを目指している。様々な理由からExpression vectorを利用すること,大腸菌と哺乳類細胞の両方の系で並行してスクリーニングすることにし,まずACNU頻回処理によってラット脳腫瘍細胞株からO^6-AGT活性の高い株を分離した。この細胞のpolyA RNAからクローン数10^6以上,数100〜3・5Kbのインサートを持つExpresison libraryを,大腸菌用、哺乳類細胞用のものをそれぞれ調整した。また,多様な哺乳類細胞を調べ,O^6-AGT活性を欠きACNU感受性でトランスフェクション効率の良い細胞株を同定し,recipient細胞として使っている。さらに最終的なスクリーニングのため,抗O^6-エチルグアニン抗体を利用した高感度のO^6-AGT測定法を開発した(従来の方法に比べ約25倍)。以上,クローニングに至るまでの各ステップの改良に努め,特にO^6-AGTの高感度測定法によって少量の細胞・組織でも測定が可能となり他の目的にも応用し得る。現在全体を通した実験を行い,最終的にトランスンフェクションによってO^6-AGT陰性から陽性に変化した細胞のクローンの同定に努めている。

The identification of the importance of N-phenylethanol compounds during the process of cancer, the identification of the importance of breast cancer, the identification of the importance of breast cancer, the identification of the importance of cancer, and the identification of the importance of cancer. The reason for this is that Expression vector is used to isolate high-activity strains of mammalian cells, including bacteria, mammalian cells, mammalian cells, bacteria, mammalian cells, and mammalian cells. The number of polyA RNA cells is more than 10 ^ 6, and the number is 100 ~ 3. The number of 5Kb cells is 100 ~ 3. They hold Expresison library. They are used by bacteria and mammals. The activity of O ^ 6-AGT in mammalian cells is not sensitive to ACNU. The rate of positive cells is the same as that of normal cells, while that of recipient cells is the same. The most sensitive method, the anti-O