Charakterisierung von Cytochrom P450-Monooxygenasen und deren Genen aus dem Isoflavon/Pterocarpanstoffwechsel der Kichererbse (Cicer arietinum)

通过对细胞色素P450-单氧酶分离韦尔登的5个已知cDNAs的测序，我们发现了3个新的细胞色素P450片段。Davon gehören allein 5 Sequenzen der Familie CYP 81 an.通过诱导培养，对该家系的基因表达进行了研究，并进行了两次测序。在药理学研究中，对CYP 81 E2和CYP 81 E3进行了深入的分析，发现异黄酮还原酶对植物抗毒素生物合成的调节作用。Zimtsäure-4-Hydroxylase的Mit Hilfe konnte die Eignung des Hefeexpressions systems auch für die heterologe Expression von Cytochrom P450-Monooxygenasen aus der Kichererebse nachgewiesen韦尔登。在其他方面，Verlauf只能通过异源实验酶韦尔登的生物化学方法进行工作。这是一个由Stoffwechselreaktionen提供的完全相同的序列。Außerdem sollen biochemische Kenndaten und die Substratspezifität untersucht韦尔登.

Aus der Kichererbse konnten im Rahmen dieses Projekts erstmals 5 vollständige cDNAs für Cytochrom P450-Monooxygenasen isoliert werden, zusätzlich wurden weitere drei neue Cytochrom P450 Fragmente erhalten. Davon gehören allein 5 Sequenzen der Familie CYP81 an. Expressionsstudien haben gezeigt, daß die Gene der Mitglieder dieser Familie, wie auch zwei weitere Sequenzen, in Zellsuspensionskulturen der Kichererbse durch Elicitierung induzierbar sind. In pharmakologischen Untersuchungen zeigten die beiden analysierten CYP81E2 und CYP81E3 eine exakte Übereinstimmung der Regulation mit der Isoflavon-Reduktase, dem vorletzten Enzym der Phytoalexinbiosynthese in der Kichererbse. Mit Hilfe der Zimtsäure-4-Hydroxylase konnte die Eignung des Hefeexpressionssystems auch für die heterologe Expression von Cytochrom P450-Monooxygenasen aus der Kichererbse nachgewiesen werden. Im weiteren Verlauf sollen die Arbeiten durch umfangreiche biochemische Studien der heterolog expremierten Enzyme abgeschlossen werden. Dazu soll eine Zuordnung von Stoffwechselreaktionen zu allen isolierten Sequenzen erfolgen. Außerdem sollen biochemische Kenndaten und die Substratspezifität untersucht werden.