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オートファジー・アミノ酸代謝に基づいた難治性白血病の病態解明と治療応用

难治性白血病病理学的阐明及基于自噬和氨基酸代谢的治疗应用

基本信息

批准号：
22KJ3215
负责人：
山嵜博未
金额：
$ 3.08万
依托单位：
Foundation for Biomedical Research and Innovation at Kobe
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ3215/
关键词：
アミノ酸トランスポーター LAT1 SLC7A5 急性骨髄性白血病

项目摘要

本申請では、急性骨髄性白血病（AML）においてアミノ酸マスター因子である転写因子ATF4がアミノ酸合成系の活性化の両方を促進することで病態発症・進展に寄与するかを明らかにすることを目的とし、研究を開始した。ヒト白血病細胞株（K562、MOLM13、TF-1）およびマウス白血病細胞株（RN2、BaF/3）にCas9を発現させた細胞に対して、sgATF4発現ベクターを導入し、ATF4欠失細胞が野生型細胞との競合的培養条件において経時的に減少することを明らかにした。ATF4欠失細胞は、G1/S遷移の遅延/停止を伴う低下を示した。近年、ATF4は正常造血にも寄与し、造血幹細胞の機能維持を担うことが報告されており（Sun et al., Science Advances 2021）、急性骨髄性白血病の治療標的としてはATF4の下流を探索することが不可欠だと考えた。そこで、白血病細胞株を用いたCRISPRスクリーニングの報告をもとに（Shi et al., Science Advances 2021）、白血病の生存・増殖に重要なはたらきを示すATF4の標的遺伝子を探索した。複数の候補遺伝子のsgRNA発現ベクターを作成し、それぞれ白血病細胞株に導入した。その結果、特に分岐鎖アミノ酸トランスポーターSLC7A5および葉酸合成酵素MTHFD1に対するsgRNAを導入した白血病細胞が競合的培養条件で減少することを明らかにした。

The present application is intended to initiate research into the activation of ATF4 in the context of acute osteoblastic leukemia (AML). Leukemia cell lines (K562, MOLM13, TF-1) were introduced into leukemia cell lines (RN2, BaF/3) with Cas9 and sgATF4 respectively. ATF4 missing cells, G1/S migration delay/stop, low level In recent years, ATF4 has been reported to be responsible for the maintenance of normal hematopoietic stem cell function (Sun et al., Science Advances 2021), the treatment target of acute osteoblastic leukemia, and the exploration of ATF4. CRISPR and leukemia cell lines were used in the study (Shi et al., Science Advances 2021), the survival and growth of leukemia important information to show ATF4 target gene to explore The sgRNA expression of multiple candidate genes was prepared and introduced into leukemia cell lines. As a result, specific differentiation was achieved by introducing sgRNA into leukemia cells under competing culture conditions such as SLC7A5 and folate synthase MTHFD1.