細胞増殖及び色素体分化にともなう植物ミトコンドリアゲノムの機能的分化

细胞增殖和质体分化过程中植物线粒体基因组的功能分化

基本信息

  • 批准号:
    08740612
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 0.64万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
  • 财政年份:
    1996
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1996 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

タバコ培養細胞BY-2からミトコンドリア核を単離する手法を確立した。この際、細胞核と色素体核も同時に単離することができる。対数増殖期の細胞約10^9個を出発材料とした場合、ミトコンドリア核の収率は5%で、収量は80μgDNAであった。サザンハイブリダイゼーションにより細胞核DNAおよび色素体DNAの混入率を測定した結果、単離ミトコンドリア核の純度は98%であった。分化にともなうミトコンドリアゲノムの機能変化を明らかにするために、タバコ緑葉からミトコンドリア核を単離する方法の開発も行っているが、収量の点でなお改善が必要である。BY-2から単離したミトコンドリア核を適当な条件下でインキュベートすると、[5,6-^3H]UTPを高分子画分に取り込む活性を示す(7pmol/μgDNA/hr)。この活性はDNAおよびタンパク質に依存したRNA合成であり、アクチノマイシンDやEB、N-ethylmaleimide、ヘパリンにより阻害されるが、α-アマニチン、リファンピシン、タゲチトキシン、ナリジキシン酸、及びノボビオシンでは阻害されない。in vitroで合成されたRNAは、ミトコンドリアDNAと特異的にハイブリダイズした。単離ミトコンドリア核はまた、[5-^3H]dCTPの取り込み活性も示す(48pmol/μgDNA/hr)。この活性はDNAおよびタンパク質に依存したDNA合成であり、アクチノマイシンDやEB、N-ethylmaleimide、ddCTP、ヘパリンにより阻害されるが、アフィデイコリン、ナリジキシン酸、ノボビオシンでは阻害されない。in vitroで合成されたDNAの制限酵素解析の結果、DNA合成はミトコンドリアDNAの全領域にわたって起きていることが明らかになった。また、ミトコンドリア核構成タンパク質をSDS-PAGE後、ゲル内DNAポリメラーゼアッセイにかけたところ、分子量約116kDaのDNAポリメラーゼが検出された。本研究の結果、単離ミトコンドリア核のDNA合成反応の至適条件や各種阻害剤に対する応答、DNAポリメラーゼの分子量などは、単離色素体核のそれらと極めて類似していることが明らかになった。この色素体及びミトコンドリアのDNA合成装置の類似性は、両オルガネラのDNAの合成が、細胞増殖初期にそろって活性化される機構を説明するものかもしれない。
The method of cell culture BY-2 was established. At the same time, the pigment nucleus and the somatic nucleus are separated. The number of cells in the growth period was about 10^9. When the number of cells in the growth period was about 5%, the number of cells in the growth period was about 80μ g. The purity of DNA was 98%. It is necessary to improve the development and operation of the method of functional transformation of differentiation and quantity. By-2 was isolated from a mixture of [5,6-^3H] UTP and [5,6-^3H] UTP. Under appropriate conditions, the activity of [5,6-^3H]UTP was measured at 7pmol/μ g DNA/hr. The activity of this enzyme is dependent on DNA synthesis, DNA synthesis, EB, N-ethylmaleimide, DNA synthesis, α-DNA synthesis, DNA synthesis, RNA synthesis, and DNA synthesis. In vitro, RNA is synthesized and DNA is isolated. The activity of [5-^3H]dCTP was detected at 48pmol/μ g DNA/hr. The activity of this enzyme depends on DNA synthesis, DNA synthesis, EB, N-ethylmaleimide, ddCTP, DNA synthesis, DNA synthesis, In vitro, DNA synthesis is controlled by enzyme analysis, DNA synthesis is controlled by enzyme analysis, and DNA synthesis is controlled by enzyme analysis. After SDS-PAGE, the DNA fragments in the DNA fragments were detected with a molecular weight of about 116 kDa. The results of this study show that the optimal conditions for DNA synthesis in isolated DNA nuclei, the molecular weight of DNA in isolated DNA nuclei, and the molecular weight of isolated DNA nuclei are similar to each other. The similarity of the pigment and the DNA synthesis apparatus of the cell culture is described in the following paragraphs: DNA synthesis, activation mechanism in the early stage of cell culture

项目成果

期刊论文数量(6)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Koitabashi R et al.: "1,8-cineloe inhibits root growth and DNA synthesis in the root apical meristem of Brassica campestris L." J. Plant Res.in press. (1997)
Koitabashi R 等人:“1,8-cineloe 抑制甘蓝根部生长和根尖分生组织中的 DNA 合成。”
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Suzuki T et al.: "Organelle DNA synthesis before cell muclear replication is essential for subsequent cell propagation." Cytologia. 61. 235-245 (1996)
Suzuki T 等人:“细胞核复制之前的细胞器 DNA 合成对于随后的细胞增殖至关重要。”
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Matsunaga S et al.: "Cytological analysis of the mature pollen of Actinidia deliciosa (kiwifruit)." Cytologia. 61. 337-341 (1996)
Matsunaga S 等人:“美味猕猴桃(猕猴桃)成熟花粉的细胞学分析。”
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Suzuki T et al.: "Variability of mitochondrial subgenomic molecules in the meristematic cells of higher plants." Genes Genet. Syst.71. 329-333 (1996)
Suzuki T 等人:“高等植物分生组织细胞中线粒体亚基因组分子的变异性。”
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Matsunaga S et al.: "Isolation and developmental expression of male reproductive organ-specific genes in a dioecious campion,Melandrium album (Silene latifolia)." Plant J.10. 679-689 (1996)
Matsunaga S 等人:“雌雄异株的雄性生殖器官特异性基因的分离和发育表达,Melandium album (Silene latifolia)。”
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  • 发表时间:
  • 期刊:
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  • 作者:
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知道了