不死化細胞株におけるテロメラーゼ活性発現機構の解析

永生化细胞系端粒酶活性表达机制分析

• 批准号: 08760094
• 负责人: 片倉 喜範
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08760094/
• 关键词: テロメラーゼ; テロメア; ガン細胞; A549; 細胞老化

ヒト肺ガン細胞株A549細胞とそれより単離したトランスフォーム表現型消失性亜株であるA5DC7細胞を用い、ガン細胞におけるテロメラーゼ活性消失機構とそれに伴いガン細胞の正常化機構の解析を行った。親株であるA549細胞の有するガン細胞としての表現型を消失したA5DC7細胞のテロメラーゼ活性をTRAP(Telomere Repeat Amplification Protocol)法により測定したところ、テロメラーゼ活性の大幅な減退が観察された。そこでこのA5DC7細胞の長期培養を試みたところ、テロメラーゼ活性の減退に相関して、テロメア長の大幅な短縮が観察された。その後も継代を続けると、約100PDL(Population Doubling Level)付近において増殖を完全に停止し、老化細胞様の表現型を有する細胞へと変化していく様子が観察された。この老化表現型を示し始めた細胞群の、細胞老化のマーカーであるとされているβ-ガラクトシダーゼ活性を、X-gal染色により測定したところ、100PDL付近で老化表現型を示し始めたA5DC7細胞でのみ、β-ガラクトシダーゼ活性を発現していることが明らかとなった。つまり、ガン細胞であるA549細胞から樹立したA5DC7細胞は、テロメラーゼ活性を消失しており、テロメアの短縮とともに老化細胞へと変化する正常老化細胞であることが明らかとなった。さらに、A5DC7細胞のクローニングを行い、そのポピュレーションの解析を行ったところ、A4DC7細胞には足場非依存性増殖能をもつA549細胞様の細胞群は含まれておらず、クローニングされた細胞群はすべて老化様表現型を示しうる細胞であった。また、老化表現型を有し、細胞増殖を完全に停止したA5DC7細胞の培養条件を変化させることで、A5DC7細胞が再び増殖を開始していくことが新たに見いだされた。この増殖の再開とともに、テロメラーゼ活性が再び活性化され、それに相関してテロメア長の伸張も認められた。ポピュレーションの解析とともに類推すると、正常老化細胞としてテロメアの短縮とともに一度は完全に増殖を停止したA5DC7細胞が、培養状況の変化に応答してテロメラーゼ活性を再び活性化し、再び無限寿命性が付与されたものと考えられた。この結果は、細胞の分化やガン化の際の不可逆的なテロメラーゼ制御機構とは別の精密な制御機構の存在を示唆するものである。

Analysis of the mechanism for normalization of lung cell line A549 cells with loss of phenotype in A5DC7 cells The phenotype of A549 cells disappeared and the activity of A5DC7 cells decreased significantly by TRAP(Telomere Repeat Amplification Protocol) method. In addition, the long-term culture of A5DC7 cells was studied. The results showed that the activity of A5DC7 cells decreased, and the length of A5DC7 cells decreased significantly. About 100PDL(Population Doubling Level) is required for the complete cessation of cell proliferation, and the phenotype of aging cells. The aging phenotype was shown in the cell population and cell aging. β-glucuronidase activity was measured by X-gal staining. 100PDL was used to show the aging phenotype of A5DC7 cells. β-glucuronidase activity was detected in the cell population. A549 cells grow up and A5DC7 cells grow up and lose their activity. Aging cells grow up and change into normal aging cells. In addition, A5DC7 cells were used to analyze the phenotype of aging, and A4DC7 cells were used to analyze the phenotype of aging. A5DC7 cell culture conditions were changed, and A5DC 7 cell regeneration was started. This is the first time I've ever seen a woman. The analysis and analysis of the normal aging cells showed that the growth of A5DC7 cells was completely stopped, and the activity of A5DC7 cells was reactivated. The results show that the cell differentiation process is irreversible and the existence of precise control mechanisms is inevitable.

项目成果

Yingpei Zhang: "Evience that phosphatidylcholine-specific phospholipase C is a key molecule mediating insulin-induced enhancement of gene expression from human cytomegalovirus promoter in CHO cells" Cytotechnology. 23. 193-196 (1997)

张英培：“有证据表明磷脂酰胆碱特异性磷脂酶 C 是介导 CHO 细胞中人巨细胞病毒启动子诱导的胰岛素诱导基因表达增强的关键分子”《细胞技术》。

Yoshinori KATAKURA: "A small variance in the antigenicity but not function of recombinant β-lactoglobulin purified from the culture supernatant of transformed yeast cells." Cytotechnology. 23. 133-141 (1997)

Yoshinori KATAKURA：“从转化酵母细胞的培养物上清液中纯化的重组 β-乳球蛋白的抗原性存在微小差异，但功能没有差异。” 23. 133-141 (1997)。

Yoshinori KATAKURA: "Telomerase regulation in differentiated serum-free mouse embryo cells." Proceedings of the Ninth Annual Meeting of Japanese Association for Animal Cell Technology. (発表予定). (1997)

Yoshinori KATAKURA：“分化的无血清小鼠胚胎细胞中的端粒酶调节。”日本动物细胞技术协会第九届年会论文集（即将发表）。

Shahabuddin ALAM: "Functional Characterization of human T cells immortalized by oncogene transfection." Cytotechnology. 23. 185-192 (1997)

Shahabuddin ALAM：“通过癌基因转染永生的人类 T 细胞的功能特征。”