グルコーストランスポーターの細胞内輸送を制御する分子機構に関する細胞形態学的研究

细胞形态学研究控制细胞内葡萄糖转运蛋白转运的分子机制

• 批准号: 08770003
• 负责人: 鈴木 雅一
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Gunma University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08770003/
• 关键词: グルコーストランスポーター; GLUT4; 3T3-L1細胞; DAMP

3T3-L1細胞を安定して脂肪細胞に分化させるには厳密な条件設定が必要である。今回は国立健康栄養研究所江崎治部長より状態の良い3T3-L1細胞を入手し、当研究室での実験系を確立した。脂肪細胞への分化はコンフルエントにした3T3-L1細胞を2日間0.5mM3-isobutyl-1-methyl-xanthine/1μ M dexamethasone/DMEMで培養し、さらに2日間1μg insulin/DMEMで培養することにより行い、脂肪滴が現れて10日目のグルコーストランスポーターGLUT4が十分産生されている細胞を用いて実験を行った。なお、二重蛍光抗体法を使用する際にはLR-whiteの準超薄切片ではバックグラウンドが多かったので、凍結準超薄切片を用いた。まず、3T3-L1脂肪細胞を1μM insulinで処理することによりGLUT4が細胞表面に移行することを観察した。次に、GLUT4の小胞とpHとの関連を調べるために、3T3-L1脂肪細胞をinsulinとDAMP(3-(2,4-dinitroanilino)-3'-amino-N-methyldipropylamine)で同時に処理し、二重蛍光抗体法を用いて検鏡した。GLUT4とpHの低い箇所を示すDAMPの分布には明瞭な一致は観察されなかったが、10μM,25μM,50μM,100μMの濃度でDAMPを加えると濃度が高いほどGLUT4の細胞表面への移行が阻害される傾向がみられた。この結果はGLUT4のトランスロケーションが細胞内小胞のpHを中和することにより阻害される可能性を示唆している。

3T3-L1 cell diazepam, fat cell differentiation, differentiation, differentiation and differentiation. This time, Mr. Ezaki, director of the Department of National Health Research Institute, started with a good 3T3-L1 student and worked in the research department to ensure the establishment of the institute. 0.5mM3-isobutyl-1-methyl-xanthine/ 1 μ M dexamethasone/DMEM culture in 2 days, 1 μ g insulin/DMEM in 2 days, 1 μ g insulin/DMEM in 2 days, fat drop in 10 days, fat drop in 2 days, 1 μ M dexamethasone/DMEM in 2 days, 1 μ g in 2 days, 1 μ g in 2 days. The method of double photoantibody was used to measure the ultrathin section of the LR-white standard. 3T3-L1 fat cell 1 μ M insulin