遺伝子治療に代替するトランスジェニック寄生虫を用いた治療法開発に関する萌芽的研究

使用转基因寄生虫替代基因治疗的治疗方法的探索性研究

• 批准号: 08876066
• 负责人: 杉山 広
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: National Institute of Infectious Diseases
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08876066/
• 关键词: 住血吸虫; トランスジェニック; 遺伝子治療; 虫卵遺伝子; 培養; 発現調節; 遺伝子導入; トランスジェニック寄生虫; 卵殻遺伝子; 細胞培養

有用遺伝子を導入したトランスジェニック寄生虫を作出し、宿主体内の特定部位で安定して有用物質を産生させ、遺伝子治療に代替させることが本研究の究極の目的である。住血吸虫は、虫卵関連遺伝子を優先的に発現させ産卵を継続することから、血管内で有用物質を産生させるトランスジェニック寄生虫の最適のモデルとなる。今年度も、トランスジェニック寄生虫の作出に結びつく多くの成績を得た。(1) 虫卵関連遺伝子に関する検討 1.有用遺伝子は虫卵関連遺伝子の下流側に導入する為、虫卵関連遺伝子の発現調節機構に関与する遺伝子構造の解析に努めた。2.まず、ゲノムDNAクローン(3.4kbのEcoRIフラグメントを 持つ)をライブラリーから分離、塩基配列を決定した。3.5非翻訳領域(2,336bp)の解析をプライマーエクス テンション法で進めた。翻訳開始部位の上流25bpの位置に転写開始部位の存在が示唆された。 4.転写開始部位から上流の配列よりデリーションミュータントを作出し、CATアッセイで転写活性の測定を行うことを検討している。5.同様に、マンソン住血吸虫(近縁種)のゲノムDNAクローン(3.2kb)を得、配列を決定した。6.日本とマンソンとの交雑実験で産卵が見られることから、両種に共通する因子・配列が発現調節機構として関与しており、極めて強い転写活性を維持している可能性が高い。今後は、両種を比較しながら更に検討を進めていきたい。(2) 遺伝子導入を試みる為の住血吸虫細胞の培養系の確立に関する検討 1.スポロシスト(感染貝由来)の短期培養系を確立した。この方法を応用してFISH法を試み、我々が見出した虫卵関連遺伝子の遺伝子座位は、第1染色体・短腕部に局在することを明らかにした。既知の雌特異的遺伝子群とは部位が異なった。2.スポロシストの細胞はin vitroで2箇月以上、分裂しながら生存することを再確認した。遺伝子導入を試みる為の培養細胞は、スポロシストから調整することが有望である。

The ultimate goal of this study is to introduce useful genes into the host, stabilize specific parts of the host, produce useful substances, and replace them with gene therapy. Schistosoma japonicum, egg related genes, preferential development, oviposition, production of useful substances in blood vessels, and optimal development of parasites This year, the parasite has made a lot of achievements. (1)1. Analysis of the downstream introduction of useful genes and the regulation mechanism of the development of egg-related genes 2. DNA sequencing (3.4kb EcoRI sequencing) is required to determine the sequence of DNA fragments. 3.5 Analysis of non-inverted domain (2,336bp) by using the method of "analysis of non-inverted domain." 25bp upstream from the start of translation, the presence of the start of translation is not detected. 4. Determination of the activity of CAT at the beginning of writing 5. In the same way, the sequence of Schistosoma japonicum (near species) was determined by DNA sequencing (3.2kb). 6. The possibility of maintaining the activity of the gene is high. In the future, we will continue to make progress. (2)1. Establishment of a short-term culture system for Schistosoma japonicum cells This method was tested by FISH, and we found that the egg related gene was located in the first chromosome and the short arm of the chromosome. It is known that the female specific genetic group and the opposite part are different. 2. The cells in vitro are more than 2 months old, and the cells in vitro are reconfirmed. In order to improve the quality of cultured cells, the gene transfer experiment was conducted.

项目成果

杉山広 他: "34kDaの卵殻前駆体蛋白質をコードする日本住血吸虫遺伝子の構造解析" 寄生虫学雑誌. 45・Suppl.109- (1996)

Hiroshi Sugiyama 等：“编码 34kDa 蛋壳前体蛋白的日本血吸虫基因的结构分析”Journal of Parasitology 45·Suppl.109- (1996)。

SUGIYAMA H et al: "Sdvistosoma japonicum : genomic organization of the 34 kDa eggshell precursor protein gone." Parasitology International. 47(Suppl). 338 (1998)

SUGIYAMA H 等人：“Sdvistosoma japonicum：34 kDa 蛋壳前体蛋白的基因组组织消失了。”

SUGIYAMA,H.et al.: "A novel cDNA clone of schistosoma Japonicum encoding the 34,000 dalton eggshell precursor protein." International Journal for Parasitology. 27・7. 811-817 (1997)

SUGIYAMA, H. 等人：“日本血吸虫的新型 cDNA 克隆，编码 34,000 道尔顿蛋壳前体蛋白。”国际寄生虫学杂志 27·7 (1997)。

SUGIYAMA,H.et al.: "Schistosoma japonicum : genomic organization of th 34 kDa eggshell precursor protein gene" Proceedings of the 9th International Congress of Parasitology. (in press). (1997)

SUGIYAMA,H.et al.：“日本血吸虫：34 kDa 蛋壳前体蛋白基因的基因组组织”第九届国际寄生虫学大会论文集。

杉山広 他: "日本住血吸虫・雌虫体のマウス体内での発育とそれに伴う卵殻前駆体蛋白質遺伝子の発現状況" Parasitology International. 1・1(in press). (1997)

Hiroshi Sugiyama 等：“日本血吸虫雌性蠕虫在小鼠体内的发育和蛋壳前体蛋白基因的相关表达状态”，Parasitology International 1·1（出版中）。