「生物工場」実現に向けたニワトリ卵白における組換えタンパク質のヒト型糖鎖修飾

鸡蛋清重组蛋白的人型糖基化，实现“生物工厂”

• 批准号: 22K19260
• 负责人: 大石 勲
• 金额: $ 4.16万
• 依托单位: National Institute of Advanced Industrial Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-06-30 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K19260/
• 关键词: 糖鎖修飾; 糖転移酵素; ニワトリ; 組換えタンパク質; シアル酸; ガラクトース; 糖鎖; トランスジェニック

バイオ医薬品など組換えタンパク質の需要は拡大しているが、現在の培養細胞を用いた高コストの製造技術は改善する必要がある。我々は遺伝子組換えニワトリの卵白に様々な組換えタンパク質を低コストで生産する技術を開発したが、医薬品製造などへの応用を考えたときにN-結合型糖鎖修飾がヒト型と比較して不完全であること（具体的には末端のガラクトースならびにシアル酸が欠けていること）が解決すべき課題であった。この糖鎖修飾の違いは、ニワトリ卵管細胞に発現する糖転移酵素の特性により決定されているため、適切な糖転移酵素を卵管細胞に発現させることで、卵管細胞により生産された卵白中の組換えタンパク質に、ヒト型のN-結合型糖鎖修飾が実現することが期待される。本年度、卵管組織でβ-1,4-galactosyltransferase 1 (ガラクトース転移酵素)とβ-galactoside α-2,6-sialyltransferase 1 (シアル酸転移酵素)を発現するノックインニワトリを樹立した。卵管特異的に発現させることを企図し、オボムコイドの翻訳開始点に２A自己切断ペプチド配列を介して両糖転移酵素が発現するようデザインした。ゲノム編集技術による遺伝子ノックインにより企図したニワトリの樹立に成功し、卵白におけるタンパク質のガラクトースならびにシアル酸修飾の顕著な亢進が認められた。このニワトリを他の組換えタンパク質を卵白に発現するニワトリと交配することで、該タンパク質のN-結合型糖鎖修飾をヒト型に近づけることができると期待される。

バイオmedical product など group replaces the えタンパクquality は拡大しているが, and now the cultured cells are improved using the いた高コストの manufacturing technology. My 々は人伝子组选 えニワトリの Egg white に様々な 组选 えタンパクquality を Low コストでProduction technology and technology, medical product manufacturing technology and manufacturing technology Combined sugar lock modified がヒト type と comparison し て incomplete で あ る こ と (specific に は END のガラクトースならびにシアル acid がowed けていること）がsolved the すべきproject であった.このglycolock modification のviolation いは, ニワトリovary tube cell に発 appear するglycotransferase のcharacteristics によりdetermination されているため, appropriate な glucotransferase をovary tube cell に発Now, the egg whites produced by the oviduct cells are replaced by the egg whites.ク之に, ヒト-type のN-bonded sugar lock modified が実appears することがlooks forward to される. This year, oviduct tissue でβ-1,4-galactosyltransferase 1 (ガラクトース転 transfer enzyme) とβ-galactoside α-2,6-sialyltransferase 1 (Seramic acid transfer enzyme) するノックインニワトリをEstablishment of した. The starting point of fallopian tube-specific testicles and ovarian tube-specific symptoms is 2A Cut it off by yourself.ゲノムCompilation Technologyにおけるタンパク性のガラクトースならびにシアル acid modified の顕与な Hyperactive がcognize められた.このニワトリをhis の group replacement えタンパクquality を egg white に発 appear するニワトリと mating することで, This is an N-bonded glycol-lock modified をヒト-type にNearly づけることができるとLooking forward to される.