Developing a versatile technique to create transgenic rodents and medium sized animals

开发一种多功能技术来创造转基因啮齿动物和中型动物

• 批准号: 21H02388
• 负责人: 依馬 正次
• 金额: $ 11.23万
• 依托单位: Shiga University of Medical Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21H02388/
• 关键词: トランスポゾン; トランスジェニック; トランスポザーゼ

外来DNA断片をゲノムに挿入するTg作製技術は、1980年に開発された受精卵の前核に線状化DNAを顕微注入する方法が40年以上に渡って世界的に使用されているものの、その効率は数%-数十％と低いことが課題であった。さらに、100kbを超える長大なDNA（BAC（Bacterial artificial chromosome）Tgなど）になると作出効率がさらに低下してしまうことも課題であった。このようにTg作製技術の課題を広く俯瞰し、全く新しいTg作製手法の開発が必要と考えられた。20年程前からSleeping beauty, PiggyBac, Tol2などのトランスポザーゼが発見され、ゲノムにDNAを組み込む活性に着目して、Tg動物の作製に用いられてきたが、Tgを持つ細胞と持たない細胞から成るモザイク個体が得られてしまうことと、異なる場所に挿入される課題があるため、Tg作製の現場では殆ど使用されていない。前年度に引き続いて比較的短いトランスジーンやBACトランスジェニックマウスの作製に取り組み、モザイク性を評価した。さらに同じ方法をカニクイザルに適用し、トランスジェニックカニクイザル胎児を得ることに成功した。

Foreign DNA fragments must be inserted into the Tg production technology. Since 1980, the method of linear DNA microinjection has been used in the world for more than 40 years. The efficiency is several %-tens of %. 100kb DNA (BAC (Bacterial artificial chromosome) Tg) is a low production rate. The research on Tg manufacturing technology is very important, and it is necessary to develop new Tg manufacturing technology. 20 years ago, Sleeping beauty, PiggyBac, Tol2, and the development of a variety of topics, such as DNA organization, activity, Tg, animal production, use, Tg, cell support, cell development, individual acquisition, and site entry, Tg, production, and site use. In the previous year, we compared the short-term performance of BAC with that of other companies. The same method was used to determine the success of the project.

项目成果

PKD1ノックアウトカニクイザルの作製・解析と今後の展開

PKD1敲除食蟹猴的创建、分析及未来发展

• 发表时间: 2022
• 作者: SATO’O Yusuke;OMOE Katsuhiko;AIKAWA Yasuko;KANO Mayuko;ONO Hisaya K.;HU Dong-Liang;NAKANE Akio;SUGAI Motoyuki;依馬 正次
• 通讯作者: 依馬 正次

遺伝子改変カニクイザルを用いた ヒト疾患モデリング

使用转基因食蟹猴建立人类疾病模型

• 发表时间: 2021
• 作者: Umeda Kaoru;Ono Hisaya K.;Wada Takayuki;Motooka Daisuke;Nakamura Shota;Nakamura Hiromi;Hu Dong-Liang;依馬 正次
• 通讯作者: 依馬 正次