多糸染色体の人工的作製のための基礎的研究

人工创造多线染色体的基础研究

• 批准号: 08878129
• 负责人: 山下 茂
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Toho University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 1997
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08878129/
• 关键词: 多糸染色体; DNA複製; ゲノム倍数化; カフェイン; MCM蛋白質; K252-a

ショウジョウバエの唾腺染色体に代表される多糸染色体は、遺伝子のマッピングや転写節機構の研究などの分子遺伝学的研究に広く利用されているにもかかわらず、その形成機構の解明をめざす研究は少ない。また大きな利点にもかかわらず、多糸染色体を利用できる生物種は少ないので、人工的に任意の生物種の染色体を用いて多糸染色体が作製できれば、遺伝子座の精密な決定など、応用範囲が飛躍的に広がることが期待される。本研究は多糸染色体の人工的作製に必要な基礎的知見を得ることを目的として行った。前年度の研究結果によりカフェインのDNA再複製促進作用が認められたので、MCM蛋白質の局在に対するカフェインの効果について検討した。アフリカツメガエル未受精卵をカルシウムイオノフォアで処理することにより得られる賦活卵をEGTAを含む緩衝液中で破砕し、低速遠心を行い、上清をS期卵抽出液とした。ツメガエル精子核を、ロ-ダミンで標識したdUTPとともにS期卵抽出液に加えてインキュベートした。経時的に核を含む卵抽出液の少量を取り出し、抗MCM2抗体およびFITC標識二次元抗体を用いた蛍光抗体法によりMCM2の局在を調べた。インキュベート開始から15分以内にDNA複製が開始したが、このときMCM2は核に局在が認められた。その後、核局在を示す蛍光の強さは次第に減弱し30分後には認められなくなった。10mMカフェイン存在下で同様の実験を行ったが、核に局在するMCM2の減少の時間経過は非存在下の場合と同様であった。これらの結果から、カフェインのDNA再複製促進作用は核に局在するMCM蛋白質の減少の抑制によるものではないことが示唆された。

The chromosome of salivary gland is represented by multiple chromosomes, genes and molecular genetics. The use of chromosomes in biological species, artificial species and any biological species, the use of chromosomes in polysomy, the precise determination of genetic loci, and the use of DNA in biological species are expected. This study aims to establish the basic knowledge necessary for the artificial production of multiple chromosomes. The results of the previous year's study showed that MCM protein promotes DNA replication, and MCM protein plays an important role in DNA replication. Unfertilized eggs are treated in EGTA buffer, low speed telecentric medium, supernatant and S phase egg extract. The sperm nucleus is labeled as dUTP, and the sperm extract is labeled as dUTP. A small amount of the extract from the nucleus containing the eggs was extracted, and the anti-MCM 2 antibody and FITC labeled secondary antibody were used to adjust the MCM2 status. DNA replication begins within 15 minutes of the start of the game, and MCM2 begins to recognize the game. After 30 minutes, the nuclear authorities showed that the intensity of the light was decreasing. In the presence of 10mM MCM2, the same process occurs, and in the absence of MCM2, the same process occurs. The result is that DNA replication is promoted by the inhibition of MCM protein reduction in the nucleus.

项目成果

S.Miyake and S.Yamashita: "Identification of sna41 gene,which is the suppressor of nda4mutation and is involved in DNA replication in Schizosaccharomyces pombe" Genes to Cells in press. 3(3). (1998)

S.Miyake 和 S.Yamashita：“sna41 基因的鉴定，该基因是 nda4 突变的抑制因子，并参与粟酒裂殖酵母中的 DNA 复制”《Genes to Cells》正在出版。

Sanae Miyake,et al: "Identification of two Xenopus laevis genes,xMCM2 and xCDC46,with sequence homology to MCM genes invonved in DNA replication." Gene. 175. 71-75 (1996)

Sanae Miyake 等人：“鉴定了两个非洲爪蟾基因 xMCM2 和 xCDC46，与 DNA 复制中涉及的 MCM 基因具有序列同源性。”