染色体凝縮因子の活性化の機序に関する生化学的研究

染色体浓缩因子激活机制的生化研究

基本信息

  • 批准号:
    02260202
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 0.9万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 财政年份:
    1990
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1990 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

生理的染色体凝縮因子であるMPF(maturationーpromoting factor:成熟促進因子)の自己活性化におけるcdc2キナ-ゼの役割を解明するため、プロテインキナ-ゼ阻害薬であるKー252誘導体及びスタウロスポリンのcdc2キナ-ゼ活性に対する効果を調べた。また一部の薬物につきMPF活性とcdc2キナ-ゼ活性に対する効果の並行性について検討した。アフリカツメガエル未受精卵をβーグリセロリン酸及びEGTAを含む溶液中で破砕し、20,000g遠心上清のOー34%硫安画分をとり、このMPF活性を無細胞系で精子核の染色体凝縮を観察する方法で定量化し、ヒストンH1を基質としてcdc2キナ-ゼ活性を測定した。Kー252a、スタウロスポリンは30及び3μMのIC_<50>でMPF活性を、6及び0.9μMのIC_<50>でcdc2キナ-ゼ活性を抑制した.これは、両活性に対する阻害薬の効果がほぼ並行することを示唆する。Kー252b、KT5926は0.3及び120μMのIC_<50>でcdc2キナ-ゼ活性を抑制した。cdc2キナ-ゼ活性に対する抑制の強さは、Kー252b>スタウロスポリン>Kー252a>KT5926の順で、Cキナ-ゼ、Aキナ-ゼ、Gキナ-ゼ、ミオシン軽鎖キナ-ゼに対する阻害の強さの順序とは異なる。従って、これらの阻害薬に対する感受性のパタ-ンはcdc2キナ-ゼの特性を示すものである。今後更に研究を進め,タンパク質リン酸化に依存したMPFの活性化がみられる無細胞系にこれらのプロテインキナ-ゼ阻害薬を作用させることによりMPF活性化に対する抑制効果を調べ、上記のcdc2キナ-ゼに対する効果と比較する予定である。これにより、MPFの活性化に必要なタンパク質リン酸化に対するcdc2キナ-ゼ自身の寄与を知ることができる。
Physiological chromosomal condensation factor であるMPF(maturation である promoting Factor: mature promoting factor) の their activeness に お け る cdc2 キ ナ - ゼ cut を の service interpret す る た め, プ ロ テ イ ン キ ナ - ゼ resistance against 薬 で あ る K ー 252 inductor and び ス タ ウ ロ ス ポ リ ン の cdc2 キ ナ actiity ゼ に す seaborne る unseen fruit を adjustable べ た. ま た a の 薬 content に つ き MPF activity と cdc2 キ ナ actiity ゼ に す seaborne る unseen fruit の parallelism に つ い て beg し 検 た. ア フ リ カ ツ メ ガ エ ル unfertilized egg を beta ー グ リ セ ロ リ ン acid and び EGTA を in a solution containing む で broken 砕 し, 20000 g far heart の O ー 34% sulfur Ann draw points を と り, こ の MPF activity で sperm nuclear の を no cell chromosome condensation を 観 examine す る method で quantitative し, ヒ ス ト ン H1 を matrix と し て cdc2 キ ナ - ゼ Activity を assay た. 252 a, K ー ス タ ウ ロ ス ポ リ ン は 30 and び 3 microns の IC_ < > 50 で を MPF activity, 6 and 0.9 mu M の び IC_ < > 50 で cdc2 キ ナ - ゼ inhibition し を た. こ れ は, struck activity に す seaborne る resistance against 薬 の unseen fruit が ほ ぼ parallel す る こ と を in stopping す る. K <s:1> 252b, KT5926 <s:1> 0.3 and び120μM <s:1> IC_<50>でcdc2キナ-ゼ activity を inhibits た た. Cdc2 キ ナ actiity ゼ に す seaborne る strong inhibiting の さ は, K ー 252 b > ス タ ウ ロ ス ポ リ ン ー 252 A > K > KT5926 の shun で, C キ ナ ゼ, A キ ナ ゼ, G キ ナ ゼ, ミ オ シ ン 軽 lock キ ナ - ゼ に す seaborne る strong resistance against の さ の order と は different な る. 従 っ て, こ れ ら の resistance against 薬 に す seaborne る susceptibility の パ タ - ン は cdc2 キ ナ - ゼ の features を shown す も の で あ る. Future study を め, more に タ ン パ ク qualitative リ ン acidification に dependent し た MPF の activeness が み ら れ る no cell line に こ れ ら の プ ロ テ イ ン キ ナ - ゼ resistance against 薬 を role さ せ る こ と に よ り MPF activeness に す seaborne る inhibition of unseen fruit を べ, written の cdc2 キ ナ - ゼ に す seaborne る unseen fruit と compare す る designated で あ る. こ れ に よ り, MPF の activeness に necessary な タ ン パ ク qualitative リ ン acidification に す seaborne る cdc2 キ ナ - ゼ の send itself with を know る こ と が で き る.

项目成果

期刊论文数量(2)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
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专利数量(0)
山下 茂: "細胞周期の進行に対するプロテインキナ-ゼ阻害薬の効果" 日本薬理学雑誌. 96. 67T-67T (1990)
Shigeru Yamashita:“蛋白激酶抑制剂对细胞周期进展的影响”日本药理学杂志 96. 67T-67T (1990)。
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知道了