染色体凝縮因子の活性化の機序に関する生化学的研究

染色体浓缩因子激活机制的生化研究

• 批准号: 03256202
• 负责人: 山下 茂
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03256202/
• 关键词: 染色体凝縮; cdc2キナ-ゼ; MPF; M期開始; 細胞周期

生理的染色体凝縮因子であるMPFの活性化は、直接にはその1成分であるcdc2タンパク質の脱リン酸化によって生ずるが、何らかのタンパク質リン酸化がこれに関与すると推測される。このリン酸化をひきおこすプロテインキナ-ゼ及びその基質について無細胞系を用いて研究を行った。アフリカツメガエル未受精卵より調製したMPF硫安画分をATPγS存在下にインキュベ-トすると、MPF活性化がおこり、MPF及びcdc2キナ-ゼの活性はそれぞれ4倍、2倍に増加した。このインキュベ-ションの前後でcdc2タンパク質のSDSゲル電気泳動における易動度をイムノブロット法により比較すると、インキュベ-ションによる易動度の増加が観察された。これは、cdc2タンパク質が脱リン酸化されたことを示す。以上の変化はすべてATPγSに存在するので、何らかのタンパク質のチオリン酸化がcdc2タンパク質の脱リン酸化をひきおこし、MPFを活性化したと推測される。チオリン酸化を受ける基質を同定するため、MPF硫安画分を^<35>S‐ATPγSとともにインキュベ-トして ^<35>Sで標識されるタンパク質をSDSゲル電気泳動により調べると、110kDaのタンパク質が強く標識された。プロテインキナ-ゼ阻害薬であるK252aは、60μMでMPF及びcdc2キナ-ゼの活性化、cdc2タンパク質の脱リン酸化、110kDaタンパク質のチオリン酸化をいずれも強く抑制したが、20μMでは無効であった。以上から、110kDaタンパク質のチオリン酸化がMPFの活性化をひきおこす可能性が強く示唆される。

Physiological chromosome condensation factor であるMPFのactivationは、direct にはその1 component であるcdc2タンパク性The acidification of のリンって生ずるが, the acidification of のリンがこれに关 and the speculation of するとされる. The このリン acidified をひきおこすプロテインキナ-ゼ and the びそのmatrix について cell-free lines are studied with いてを行った.アフリカツメガエル unfertilized egg より modulated したMPF thiamine divided をATPγS in the presence of にインキュベ-トすると, MPF activated がおこり, MPF and びcdc2キナ-ゼのactivated はそれぞれ 4 times, 2 times に嗗added.このインキュベ-ションのfront and rear でcdc2 タンパクquality のSDSゲル电気 Swimming におけるEASY MOVEMENT をイムノブロット法により comparison すると, インキュベ-ションによるeasiness of movementのincrease plus 観看された.これは、cdc2タンパク性がDe-リン acidification されたことを Show す. The above の変化はすべてATPγSにexistentするので、何らかのタンパク性のチオリン acidificationがcdc2タンパク性のDe-nano acidification をひきおこし, MPF をactivation したと speculated される. The チオリン acidified を accepts the ける matrix を同定するため, MPF sulfide draw points を^<35>S-ATPγS とともにインキュベ-トして^<35>SでLOGO されるタンパク性をSDSゲル电気动により Adjustment べると, 110kDa のタンパクquality がstrongくLOGO された.プロテインキナ-ゼInhibits the activation of 薬であるK252aは, 60μM MPF and びcdc2 キナ-ゼの, cdc2 タンパ110kDa タンパク性のチオリン acidification をいずれもstrong したが, 20μM では ineffective であった. Above, the possibility of activating MPF with acidified MPF of 110kDa タンパク has a strong potential.