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上皮細胞に発現する新たなEBウイルスレセプターの遺伝子クローニング

上皮细胞表达的新EB病毒受体基因克隆

基本信息

批准号：
09470080
负责人：
高田賢蔵
金额：
$ 5.44万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09470080/
关键词：
EBウイルス上皮細胞ウイルスレセプター CD21

项目摘要

EBウイルス(EBV)の上皮細胞への感染を簡便にモニターするために、蛍光蛋白Enhanced green fluorescent protein(EGFP)遺伝子を組み込んだ組み換えEBV(EGFP―EBV)を作製した。このウイルスを用いた検討により、いくつかのヒト上皮細胞株がEBV感染感受性を有することを明らかにした。これらの上皮細胞株は、これまでに知られているEBVレセプター(CD21)をほとんど発現していなかった。さらに抗CD21抗体を用いたプロッキング実験により、上皮細胞への感染がCD21以外の分子をレセプターとして成立することを証明した。次に、CD21に結合するウイルス側のリガンドgp350/220とヒトIgG1Fc部分との融合蛋白gp350/220-Igを作製した。この融合室白はCD21を発現するB細胞株に強く結合したが、上皮細胞株にはほとんど結合しなかった。一方、他のウイルス粘蜜白gp25とヒトIgG1Fc部分との融合蜜白gp25-Igは、 B細胞株にはほとんど結合せずEBV感染感受性の高い上皮細胞株に強く結合した。この結果から、上皮細胞に発現するEBVレセプターに結合するウイルス側のリガンド分子はgp25であると考えられた。種々のgp25分子の欠失変異体を作製することにより、gp25分子中の上皮細胞への結合に必要な領域を決定した。その結果、アミノ酸71-100の領域が上皮細胞への結合に必須であることが明らかとなった。この領域と相同性のある蛋白をBLAST homolgysearchにより検索したところ、脂質二重膜の融合に働くsyntaxin分子との相同性が認められた。Gp25分子はsyntaxin分子と同様に、脂質二重膜の融合機構に組み込まれて働く可能性が示された。

EB epithelial cells (EBV) were infected, feces were infected, and light protein Enhanced green fluorescent protein (EGFP) was used to express EBV (EGFP-EBV). The susceptibility to EBV infection in the epithelial cell line of the mother cell line, which is sensitive to infection, is known to be sensitive to infection. The epithelium cell line, EBV cell line, CD21 cell line, epithelial cell line and epithelial cell line. The anti-CD21 antibody was used to infect the epithelial cells other than CD21. The molecular antibody was established. In the second phase, CD21 was combined with the fusion protein gp350/220-Ig, which was partially expressed in gp350/220. The fusion protein gp350/220-Ig was used in this study. In the fusion room, CD21 assay showed that the B cell line was strongly combined with the epithelial cell line and the epithelial cell line was combined with each other. On the other hand, some of the gp25 cells were fused with honey white gp25-Ig and B cell lines were fused with EBV infection susceptible epithelial cells. The results showed that the expression of EBV was detected in the epithelial cells and the expression of gp25 molecules was detected in the epithelial cells. All kinds of gp25 molecules are used to determine the molecular weight, and the epithelial cells in gp25 molecules are used to determine the necessary domain. The results show that the combination of epithelial cells in the field of 71-100% acid must be important to understand how important it is. Homology in the field, protein, BLAST homolgysearch, lipophilic acid, lipid double membrane, fusion, syntaxin molecule, homology, homology, homology. Gp25 molecule syntaxin molecule homology, lipid double membrane fusion mechanism is used to determine the possibility of molecular fusion.