硫酸化糖脂質の組織特異的発現機序と生理機能

硫酸化糖脂的组织特异性表达机制和生理功能

• 批准号: 09670143
• 负责人: 本家 孝一
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Research Institute, Osaka Medical Center for Maternal and Child Health
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09670143/
• 关键词: 硫酸化; 糖脂質; 硫酸転移酵素; 選択的スプライシング; ジーンターゲッティング

硫酸化糖脂質の発現は糖脂質硫酸転移酵素(CST)の発現によって制御されている。本研究は、CST遺伝子の組織特異的発現分布とその発現機序を調べるとともに、CST欠損マウスを作製・解析することにより、硫酸化糖脂質の生理機能を解明することを目的とし、以下の結果を得た。1.マウスCSTcDNAをクローニングした。マウスCSTは、ヒトと同じく423アミノ酸から成り、ヒトCSTとの相同性はアミノ酸レベルで84%であった。マウスCSTはヒトCSTとほぼ同等の酵素活性を有していた。2.マウスCSTmRNAは、小腸、胃>脳、腎>精巣、肺、肝臓の順に発現していた。ところが、CST活性は小腸、胃では検出されず、小腸、胃には阻害活性がみられた。3.マウスCSTには、5'非翻訳領域の異なる8種類の転写物が見つかった。これらの多様な転写物の発現パターンは臓器によって異なっていた。4,マウスCSTゲノムDNAをクローニングした。マウスCST遺伝子は全長20kbを越え、翻訳領域は2個のエクソンでコードされていた。5'非翻訳領域は7個のエクソンから成り、選択的スプライシングにより複数種の転写物を産生することがわかった。5.翻訳領域をコードするエキソン2とエキソン3の一部をNeo耐性遺伝子と置換したターゲッティングベクターを構築した。マウスES細胞にターゲッティングベクターをトランスフェクトして相同組換え体を得た。相同組換えを確認した2種類のESクローンを8細胞期胚に注入し、キメラマウスを作製した。このキメラマウスと野生型マウスを交配して、ヘテロ接合体を得た。今後、CST欠損マウスの作製を継続完遂させ、脳におけるミエリン機能及び精子形成への影響を中心に解析を行う計画である。

Sulfated glycolipids are produced by 転 glycolipid sulfate 転 enzyme (CST) is produced by によって control されて る る. は, this study traces of CST 伝 son の tissue specific 発 now distribution と そ の 発 now machine sequence を adjusting べ る と と も に, CST owe damage マ ウ ス を cropping, parsing す る こ と に よ り, sulfate sugar, lipid の physiology を interpret す る こ と を purpose と し, the result of the following の を た. 1. Youdaoplaceholder0 ウスCSTcDNAを ニ ロ ニ ニ グ た た. マ ウ ス CST は, ヒ ト と with じ く 423 ア ミ ノ acid か ら り, ヒ ト CST と の identity は ア ミ ノ acid レ ベ ル で 84% で あ っ た. Youdaoplaceholder5 ウスCST ヒト ヒトCSTとほぼ The equivalent enzyme activity を has た て た た た. 2. Youdaoplaceholder0 ウスCSTmRNA ウス, small intestine, stomach >脳, kidney > spermatic nest, lung, liver and other tissues are followed by に occurrence of て た た た. Youdaoplaceholder0 ろが ろが, CST activity と small intestine, stomach で 検 検 されず, small intestine, stomach に inhibitory activity がみられた. 3. Youdaoplaceholder6 ウスCSTに に, 5' non-translation 訳 field <s:1> different なる8 kinds of <s:1> 転 writing が can be found in った った. There are multiple な転 writings of な転, <s:1>, <s:1>, <s:1>, によって, によって and なって た た た. 4. Youdaoplaceholder6 ウスCSTゲノムDNAを ロ ロ ニ ニ グ グ た た. マ ウ ス CST posthumous son 伝 は span 20 KB を more え, turn 訳 は 2 の エ ク ソ ン で コ ー ド さ れ て い た. 5 'non turn 訳 field は seven の エ ク ソ ン か ら into り, sentaku ス プ ラ イ シ ン グ に よ り plural kinds of の planning about を produce す る こ と が わ か っ た. 5. Turn 訳 field を コ ー ド す る エ キ ソ ン 2 と エ キ ソ ン 3 の a を Neo patience heritage 伝 son と replacement し た タ ー ゲ ッ テ ィ ン グ ベ ク タ ー を build し た. マ ウ ス ES cells に タ ー ゲ ッ テ ィ ン グ ベ ク タ ー を ト ラ ン ス フ ェ ク ト し て in え body を た need to the same group. In the same group, えを confirm that た た2 types are <s:1> ロ <s:1> を を8 cell-stage embryos are に injected into <s:1> and キメラ ウスを ウスを to prepare た た. <s:1> キメラ キメラ ウスと ウスと wild-type ウスを ウスを mating て て ヘテロ mating を た. , CST owe damage マ ウ ス の cropping を 継 続 out hence さ せ, 脳 に お け る ミ エ リ ン function and び spermatogenesis へ の influence を center line analytical を に う project で あ る.

项目成果

Kobayashi,T.: "Detection of cerebroside sulfotransferase mRNA in human gastric mucosa and adenocarcinoma." Cancer Lett.(印刷中).

Kobayashi, T.：“人胃粘膜和腺癌中脑苷脂转移酶 mRNA 的检测”（正在出版）。

Honke,K.: "Molecular cloning and expression of cDNA encoding human 3'-phosphodgenylysulfate: galactosylceramide 3'-sulfotransferase" J.Biol.Chem.272(8). 4864-4868 (1997)

Honke,K.：“编码人 3-磷酸二烯基硫酸盐：半乳糖苷神经酰胺 3-磺基转移酶的 cDNA 的分子克隆和表达”J.Biol.Chem.272(8)。

Honke,K.: "Cancer-associated expression of glycolipid sulfotransferase gene in human renal cell carcinoma cells." Cancer Res.58. 3800-3805 (1998)

Honke,K.：“人肾细胞癌细胞中糖脂磺基转移酶基因的癌症相关表达。”

Yabunaka,N.: "Involvement of Ras in the expression of glycolipid sulfotransferase in human renal cancer cells." Int.J.Cancer. 71. 620-623 (1997)

Yabunaka,N.：“Ras 参与人肾癌细胞中糖脂磺基转移酶的表达。”

Honke,K.: "Molecular cloning and expression of cDNA encoding human 3'-phosphoadenylsulfate:galactosylceramide 3'-sulforansferase." J.Biol.Chem.272. 4864-4868 (1997)

Honke,K.：“编码人 3-磷酸腺苷硫酸盐：半乳糖神经酰胺 3-磺基转移酶 cDNA 的分子克隆和表达。”