脳特異的リン脂質分子種がつくる神経細胞膜機能ドメインの解明

阐明大脑特异性磷脂分子种类产生的神经元膜功能域

• 批准号: 21K06820
• 负责人: 本家 孝一
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Kochi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K06820/
• 关键词: リン脂質分子種; ドコサヘキサエン酸; ホスホリパーゼA1; 単クローン抗体; α／βヒドロラーゼ; リン脂質リモデリング; 神経細胞膜領域; 膜ドメイン

神経細胞膜は、シナプス領域、傍シナプス領域、軸索領域など、機能の異なる複数の領域をもつが、特定の機能性タンパク質が特定の領域に局在するメカニズムは不明である。研究代表者らは、シナプス前部傍アクティブゾーンにsn-1位にオレイン酸鎖をもつホスファチジルコリン(OPPC)が局在すること、リン脂質リモデリング酵素のPLRP2がon siteでOPPCの膜ドメインを形成すること、さらに、このOPPC膜ドメインが、ドーパミン輸送体 や Syntaxin 4 のシナプス領域局在に必要であることを解明してきた。本研究は、神経細胞膜の他の領域においても、特定のリン脂質分子種が固有の膜ドメインを形成し、そこに特定の機能性タンパク質が集積することを明らかにする。sn-1 位にドコサヘキサエン酸鎖をもつホスファチジルコリン（DHAPPC）を有機化学合成してマウスに免疫し、DHAPPCに対する単クローン抗体mAb10G9を得た。mAb10G9は、軸索軸部と近傍の細胞内小胞を認識することがわかった。DHAPPCの生合成に関与するホスホリパーゼA1（PLA1）を同定するため、DHAPPCを含む細胞内小胞を部分精製し、質量分析を用いたプロテオミクス解析により、リパーゼやホスホリパーゼが属するα／βヒドロラーゼファミリーメンバーABHD-Xを見出した。このABHD-Xの阻害剤処理により、軸索軸部に対するmAb10G9の反応性が消失した。ABHD-Xに対する抗体を用いた免疫染色で、ABHD-Xの局在がmAb10G9の認識部位が一致することを確認した。CRISPR/Cas9システムを用いてPC12細胞でABHD-X欠失細胞の作成を試みたが、欠失クローンを得ることができなかった。現在、ABHD-X欠失細胞を得るための別の方法を検討中である。この他、mAb10G9が認識するリン脂質分子種候補を同定した。

God 経 は, cell membrane シ ナ プ ス field, alongside シ ナ プ ス areas, axon な ど, functional の different な る plural の field を も つ が, specific の functional タ ン パ ク qualitative が の particular area に bureau in す る メ カ ニ ズ ム は unknown で あ る. Research representatives ら は, シ ナ プ ス front alongside ア ク テ ィ ブ ゾ ー ン に sn - 1 に オ レ イ ン acid lock を も つ ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン (OPPC) が bureau in す る こ と, リ ン lipid リ モ デ リ ン グ enzyme の PLRP2 が on Site で OPPC の membrane ド メ イ ン を form す る こ と, さ ら に, こ の OPPC membrane ド メ イ ン が, ド ー パ ミ ン conveying body や Syntaxin 4 の シ ナ プ ス area bureau in に necessary で あ る こ と を interpret し て き た. This study は, god 経 membranes の の に お い て も, specific の リ ン inherent の membrane lipid molecules of が ド メ イ ン を し, そ こ に の specific functional タ ン パ ク が set product quality す る こ と を Ming ら か に す る. Sn - 1 に ド コ サ ヘ キ サ エ ン acid lock を も つ ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン (DHAPPC) を organic chemical synthesis し て マ ウ ス に immune し, DHAPPC に す seaborne る 単 ク ロ ー ン antibody mAb10G9 を た. mAb10G9 と, axon axis と, adjacent to the intracellular cells of the <s:1> を recognize する とがわ とがわ った った. DHAPPC の biosynthesis に masato and す る ホ ス ホ リ パ ー ゼ A1 (PLA1) with fixed を す る た め, DHAPPC を containing む intracellular vesicular を part refined し, quality analysis を い た プ ロ テ オ ミ ク ス parsing に よ り, リ パ ー ゼ や ホ ス ホ リ パ ー ゼ が genus す る alpha/beta ヒ ド ロ ラ ー ゼ フ ァ ミ リ ー メ ン バ ー ABHD - X Youdaoplaceholder0 see た. <s:1> <s:1> ABHD-X <s:1> damage inhibitor treatment によ, the に of the shaft cable and the shaft part of the するmAb10G9 <s:1> anti-応 が disappears <s:1> た た た. を ABHD -x に す seaborne る antibody with い た immune dyeing で, ABHD -x の bureau in が mAb10G9 の know consistent parts が す る こ と を confirm し た. CRISPR/Cas9 シ ス テ ム を with い て PC12 cells で ABHD -x owe cell loss の done try を み た が, owe lost ク ロ ー ン を have る こ と が で き な か っ た. Now, ABHD-X deficient cells を obtain るため <s:1> other <s:1> methods を検 seek である. Youdaoplaceholder0, he and mAb10G9が recognize するリ, <s:1> lipid molecule species candidate を, and <s:1> た.