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ヒト腎がん特異的遺伝子発現機構の解析

人肾癌特异性基因表达机制分析

基本信息

批准号：
11139282
负责人：
本家孝一
金额：
$ 1.66万
依托单位：
Research Institute, Osaka Medical Center for Maternal and Child Health
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒト胃がん細胞では、正常腎尿細管細胞に比べて、糖脂質硫酸転移酵素(CST)活性が著明に亢進し、この原因がCSTmRNAの著明な発現によることがわかった。そこで、CST遺伝子のヒト腎がん細胞における発現メカニズムの研究を通じて、ヒト腎がん細胞特異的遺伝子発現機構を明らかにするために、以下の研究を行った。1)ヒトCSTゲノムDNAをクローニングし、全塩基配列を決定した。また、転写開始点を5'RACE法で解析した。その結果、CST遺伝子は複数の転写開始点から転写されており、腎がん細胞では、正常腎尿細管細胞とは異なる転写開始点が主として使われることを見出した。CST遺伝子は22番染色体にのっていることがわかった。2)CST遺伝子周囲に遺伝子活性化部位が存在するかを調べるために、腎がん細胞と対照細胞から核を単離し、微量のDNase Iで消化後CST遺伝子断片をプロープとしてサザンブロッティングを行い、対照細胞では切断されず、腎がん細胞でのみ切断されるDNase I感受性部位を探したが、これまでのところ、正常細胞と腎がん細胞で差異は見つかっていない。3)メチル化の可能性を調べるために、腎がん細胞と対照細胞由来のDNAをメチル化感受性とメチル化非感受性の制限酵素で消化後、CST遺伝子断片をプロープとしてサザンブロッティングを行い、両酵素による切断パターンの違いを比較したが、差異は見られなかった。4)腎がん細胞特異的転写開始点の5'上流域に、ルシフェラーゼ遺伝子を結合して、プロモーター活性を解析した。確かに、プロモーター活性は認められたが、腎がん細胞と対照細胞で差がみられず、腎がん細胞特異的な領域は見い出せていない。以上の結果より、CST遺伝子には複数の転写開始点が存在し、そのうち腎がん細胞では特定の転写開始点から開始することがわかったが、腎がん細胞における高発現には、遠隔部位に存在するエンハンサーの関与が示唆された。

Compared with normal kidney and urine tubule cells, the activity of glycolipid sulfate transferase (CST) was significantly increased, and the reasons for the expression of CST mRNA were discussed. The following research was conducted on the development of gene expression mechanisms specific to kidney cells. 1) The CST has to determine the sequence of DNA fragments. 5'RACE method is used to analyze the starting point of writing. The results of CST gene analysis show that the start point of multiple gene expression is different from that of normal renal tubule cells. CST gene is 22 chromosomes. 2)CST DNA fragments were found to be active in the cytoplasm, kidney cells, and kidney cells, and DNase I sensitive sites were detected in the cytoplasm, kidney cells, and kidney cells. Normal cells and kidney cells are different. 3) The possibility of cell transformation is regulated by enzyme digestion, CST gene fragment is regulated by enzyme, CST gene fragment 4)The 5'upper part of the kidney cell-specific writing start point is analyzed for the binding and activity of the protein. The activity of the kidney cells is different from that of the irradiation cells. The specific domain of the kidney cells is different from that of the irradiation cells. As a result, CST gene expression has a high incidence of multiple writing start points, and a high incidence of specific writing start points in kidney cells, and a high incidence of distant sites.