筋ジストロフィーの発症機構に関する研究

肌营养不良症发病机制的研究

• 批准号: 09877428
• 负责人: 沢田 均
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877428/
• 关键词: 筋ジストロフィー; ジストロフィン; ジストリプシン; mdxマウス; 筋肉疾患; プロテアーゼ

上記研究テーマに関して,当初の研究計画をほぼ完了したのでその成果を報告する.筆者は,ヒトデュシャンヌ型筋ジストロフィー症の原因遺伝子であるジストロフィンを欠損した疾患モデル動物(mdxマウス)を用いて,その発症直前の筋ミクロソーム画分で,新規トリプシン様酵素(ジストリプシンと命名)が活性化されることを報告している.本研究では,筋ジストロフィーの発症における,ジストリプシンの病態生理機能について探索した.(1)発症前あるいは初期のmdxマウス骨格筋から,ジストリプシンを大量に精製し,精製酵素に対する特異的阻害剤を探索した.その結果,ある種のメシル酸誘導体が,ジストリプシンに対して有効な阻害効果を示した.(2)この薬物を発症前(5日齢)から1カ月齢までmdxマウスに連日投与し,その発症抑制効果について,CPKの血液中への漏出と筋肉組織の顕微鏡観察を指標として検討したが,精製酵素に対する阻害活性から期待されるほどの強い発症抑制効果は確認されなかった.そこで,さらに強力な薬物を探索する目的で,鳥居薬品で開発中の4種の新規プロテアーゼ阻害剤について検討を行った.(3)精製ジストリプシンのN末端アミノ酸配列を決定する目的で,種種の検討を行ったが,精製度を上げると失活が著しく,また蛋白量が充分でないことから,ジストリプシンを同定することは困難であった.(4)ジストリプシンとともに精製(co-purify)される35K蛋白質のN末端配列を調べたところ,リュウマチ関節炎患者の滑液中の自己抗原と思われる蛋白質p205のトリプシン消化断片のペプチド配列と高い相同性を示し,おそらくこの蛋白質のホモログがmdxマウス罹患筋に存在し,マクロファージによる筋細胞の貪食を促進している可能性が考えられる.現在このペプチド抗体を作成中であり,これを用いてこの蛋白質の病態発症との関連について解析する予定である.

The research project was completed and the results were reported. The author reports on the use of the enzyme in the development of the disease in animals (mdx), and on the activation of the enzyme in the development of the disease. This study is to explore the physiological function of muscle development. (1)Before the development of the disease, the early stage of the mdx, the development of a large number of refined enzymes, refined enzymes to explore specific inhibitors As a result, the effects of various kinds of acid inducers were shown. (2)Before the onset of CPK (5 days ago),CPK was released from blood and muscle tissue by microscopic examination, and the inhibition activity of purified enzyme was expected to increase. For the purpose of exploring powerful drugs, four new regulations in the development of bird's nest drugs are discussed. (3)For the purpose of determining the N-terminal amino acid sequence of the purified protein, a variety of methods are discussed. (4)ジストリプシンとともに精制The N-terminal sequence of the (co-purify) 35K protein was modulated, and the protein p205 was found in synovial fluid of arthritis patients. The protein p205 was found in the synovial fluid of arthritis patients. The gluttony of muscle cells is promoted by the possibility of eating. Now, in the process of making the antibody, we can analyze the protein pathological development and its relationship with the protein.

项目成果

Michiko Takagi, Sawada et al.: "The proteasome is an essential mediator of the activation of pre-MPF during starfish oocyte maturation." Biochem.Biophys.Res.Commun.236. 40-43 (1997)

Michiko Takagi、Sawada 等人：“蛋白酶体是海星卵母细胞成熟过程中前 MPF 激活的重要介质。”

Hitoshi Sawada et al.: "Difference between PA700-like proteasome activator complex and the regulatory complex dissociated from the 26S proteasome implies the involvement of modulating factors in the 26S proteasome assembly." FEBS Letters. 412. 521-525 (19

Hitoshi Sawada 等人：“PA700 样蛋白酶体激活复合物与从 26S 蛋白酶体解离的调节复合物之间的差异意味着 26S 蛋白酶体组装中涉及调节因子。”

Masahiro Fujimuro et al.: "Dynamics of ubiquitin conjugation during heat-shock response revealed by using a monoclonal antibody specific to multi-ubiquitin chanins" Eur.J.Biochem. 249. 427-433 (1997)

Masahiro Fujimuro 等人：“通过使用多泛素链特异性单克隆抗体揭示热休克反应期间泛素缀合的动力学”Eur.J.Biochem。

Koji Takada et al.: "Serum concentration of free ubiquitin and multiubiquitin chain." Clinical Chemistry. 43/7. 1188-1195 (1997)

Koji Takada 等人：“游离泛素和多泛素链的血清浓度。”

Hitoshi Sawada et al.: "Protease triggers dephosphorylation of cdc2 kinase during starfish oocyte maturation." Biochemistry Molecular Biology International. 41/5. 905-911 (1997)

Hitoshi Sawada 等人：“蛋白酶在海星卵母细胞成熟过程中触发 cdc2 激酶去磷酸化。”